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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于分光光度法
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8128sherry

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于分光光度法 已有1人参与

导师今天找过去让我做分光光度法测BCAA的浓度，因为从来没接触过这个，导师给了片文章，让我看着，照着做。
不过里面对于试剂的制作，我不太明白。
文章中有一句话： leucine dehydrogenase (45.2 units/mg) is diluted to 400 units/ml in 25mM sodium phosphate buffer, PH 7.2.
这个是说我要把 leucine dehydrogenase （浓度为 5.2 units/mg）通过加入25mM的磷酸钠稀释到浓度为400 units/ml。 这个磷酸钠浓度是25mmol/L， 应该是这样，我不确定这个是否需要自己做，还是有现成的，不过磷酸钠这个我只知道浓度要求，多少克的磷酸钠加多少ML水，这些都不知道啊，应该怎么稀释呢？ 另外 稀释到400 units/ml 这个应该怎么做，具体是怎么样计算的， leucine dehydrogenase的单位是 units/mg，磷酸钠溶液的话是mmol/L，两个单位之间都不一样的话，这个浓度怎么转换。希望有大神给讲解一下，因为之前是学营养科学的，从来没接触过化学试剂制作，突然一来 有点慌张。。谢谢各位了。。。
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1楼 2016-01-12 05:59:27
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天机哥哥

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
8128sherry: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2016-01-13 06:23:09
本帖内容被屏蔽
2楼2016-01-12 10:39:42
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反应链

新虫 (正式写手)
You can buy the commercial reagent directly. (Links: http://www.cnreagent.com/s/v.php ... 4665e2f7058416ba04)

Or you can prepare 1M stock solution (pH7.2) following the protocol below.

For example, for preparation of 500mL 25mM sodium phosphate buffer, you need 12.5mL (500mL*25mM/1000mM) 1M sodium phosphate stock solution, then add ddH2O up to 500mL.

When leucine dehydrogenase (45.2 units/mg) is diluted to 400 units/ml in 25mM sodium phosphate buffer, you need to weight 8.85g leucine dehydrogenase dissolved into 1 mL 25mM sodium phosphate buffer (400 units/ml / 45.2 units/mg=8.85g/mL).
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  • 附件 1 : Preparation_of_Sodium_Phosphate_Buffers.pdf
    • 2016-01-12 12:06:46, 75.59 K
3楼2016-01-12 12:06:46
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8128sherry

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 反应链 at 2016-01-12 12:06:46
You can buy the commercial reagent directly. (Links: http://www.cnreagent.com/s/v.php?i=425287&v=9541004665e2f7058416ba04)

Or you can prepare 1M stock solution (pH7.2) following the protocol b ...

谢谢这个PDF文档，很有用，我想问下，这个文档应该去哪儿找，因为我还需要配别的溶液，有了这个会方便好多。
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4楼2016-01-13 00:29:21
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8128sherry

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 反应链 at 2016-01-12 12:06:46
You can buy the commercial reagent directly. (Links: http://www.cnreagent.com/s/v.php?i=425287&v=9541004665e2f7058416ba04)

Or you can prepare 1M stock solution (pH7.2) following the protocol b ...

我还有个困惑，就是那个文档里面 显示的是Na2HPO4和NaH2PO4，但是Sodium Phosphate 不应该是Na3PO4么？ 为什么用的试剂是这两个呢？
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5楼2016-01-13 06:44:50
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反应链

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 8128sherry at 2016-01-13 00:29:21
谢谢这个PDF文档，很有用，我想问下，这个文档应该去哪儿找，因为我还需要配别的溶液，有了这个会方便好多。...

Search on Bing.com with the pattern "preparation of ..."
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6楼2016-01-13 08:44:10
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反应链

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 8128sherry at 2016-01-13 06:44:50
我还有个困惑，就是那个文档里面 显示的是Na2HPO4和NaH2PO4，但是Sodium Phosphate 不应该是Na3PO4么？ 为什么用的试剂是这两个呢？...

Since phosphoric acid is a weak triprotic acid there are several reactions which take place in hydrolysis:

Na₃PO₄(s) ←→ 3 Na⁺(aq) + PO₄3⁻(aq)
PO₄3⁻(aq) + H₂O(l) ←→ HPO₄2⁻(aq) + OH⁻(aq)
HPO₄2⁻(aq) + H₂O(l) ←→ H₂PO₄⁻(aq) + OH⁻(aq)
H₂PO₄⁻(aq) + H₂O(l) ←→ H₃PO₄(aq) + OH⁻(aq)
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7楼2016-01-13 08:50:09
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