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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 离子交换色谱
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大饼先生

新虫 (初入文坛)

[交流] 离子交换色谱 已有4人参与

各位大侠，有做离子交换色谱的吗？再下菜鸟，有个弱弱的问题，之前用阴离子交换色谱测某双链siRNA，可行，两条单链完美分开，后换较长链检测，就不出峰了，why？谢谢大家了，有赏！
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1楼 2016-01-06 11:42:55
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月光晒谷

铜虫 (小有名气)
★
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如果样品,梯度没问题,那么可能是长链的保留太强,没有洗脱下来.多了三个碱基可能导致你的样品与填料结合能力变强,导致原方法离子浓度不够,无法洗脱下来.你可改一下梯度,增加高盐相的比例或者增加盐的浓度看看如何.
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17楼2016-01-06 21:23:50
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Swift1204

新虫 (小有名气)
★
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你的引物长度有多长？可能引物分子量太大，吸附不上离子柱。

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2楼2016-01-06 12:17:57
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Swift1204

新虫 (小有名气)
★
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那很奇怪，需要我可以找人帮你检测，质液连用的，分子量和纯度都会有！

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大饼先生
14楼2016-01-06 15:07:09
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silence18

金虫 (正式写手)
★
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离子交换色谱，如果被洗脱物与固定相结合较强，必须用更强的洗脱剂进行交换。你这种所说的不出色谱峰，很有可能是没有洗脱下来，试试增加洗脱剂的浓度，或者更换洗脱能力更强的试剂。另外一种情况，离子交换色谱柱的随着不断的使用，离子交换作用越来越弱，也有可能导致分离不出来。
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19楼2016-01-08 09:23:59
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大饼先生

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Swift1204 at 2016-01-06 12:17:57
你的引物长度有多长？可能引物分子量太大，吸附不上离子柱。

分子量大约660x25，为什么导致吸附不上去啊？有办法改善吗，谢谢了！
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3楼2016-01-06 12:35:41
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kitten1983aw

新虫 (小有名气)
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应该是分子太大了，进了柱子洗脱不下来。超过2000的分子应该用凝胶柱，或者分子筛来分析。
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4楼2016-01-06 13:41:18
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大饼先生

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kitten1983aw at 2016-01-06 13:41:18
应该是分子太大了，进了柱子洗脱不下来。超过2000的分子应该用凝胶柱，或者分子筛来分析。

我之前测的样分子量也大的，就比这个样少三个碱基对，前面的样能走出来，这个样根本走不出来，换了C18柱方法也没走出来，唉！
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5楼2016-01-06 13:57:07
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Swift1204

新虫 (小有名气)
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你的剃度有问题没？20多碱基的应该是没问题，50以上可能会有问题！

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6楼2016-01-06 14:23:39
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大饼先生

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Swift1204 at 2016-01-06 14:23:39
你的剃度有问题没？20多碱基的应该是没问题，50以上可能会有问题！

梯度没问题，一起做的，前面的样可以，就这个样不行，又做了一次也不行，我就奇了怪了
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7楼2016-01-06 14:28:58
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Swift1204

新虫 (小有名气)
★
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你确定合成出来的没有问题？

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8楼2016-01-06 14:34:17
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大饼先生

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Swift1204 at 2016-01-06 14:34:17
你确定合成出来的没有问题？

木有问题，找了两个地方合成，国内和国外，检测纯度都没走出峰，愁死我了。。。。。
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9楼2016-01-06 14:43:00
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Swift1204

新虫 (小有名气)
★
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你们找合成公司合成，为什么要纯化？

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10楼2016-01-06 14:47:34
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