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汕头大学海洋科学接受调剂
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大饼先生

新虫 (初入文坛)

[交流] 离子交换色谱 已有4人参与

各位大侠,有做离子交换色谱的吗?再下菜鸟,有个弱弱的问题,之前用阴离子交换色谱测某双链siRNA,可行,两条单链完美分开,后换较长链检测,就不出峰了,why?谢谢大家了,有赏!
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月光晒谷

铜虫 (小有名气)


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如果样品,梯度没问题,那么可能是长链的保留太强,没有洗脱下来.多了三个碱基可能导致你的样品与填料结合能力变强,导致原方法离子浓度不够,无法洗脱下来.你可改一下梯度,增加高盐相的比例或者增加盐的浓度看看如何.
17楼2016-01-06 21:23:50
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Swift1204

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你的引物长度有多长?可能引物分子量太大,吸附不上离子柱。

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2楼2016-01-06 12:17:57
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Swift1204

新虫 (小有名气)


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那很奇怪,需要我可以找人帮你检测,质液连用的,分子量和纯度都会有!

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14楼2016-01-06 15:07:09
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silence18

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
离子交换色谱,如果被洗脱物与固定相结合较强,必须用更强的洗脱剂进行交换。你这种所说的不出色谱峰,很有可能是没有洗脱下来,试试增加洗脱剂的浓度,或者更换洗脱能力更强的试剂。另外一种情况,离子交换色谱柱的随着不断的使用,离子交换作用越来越弱,也有可能导致分离不出来。
19楼2016-01-08 09:23:59
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大饼先生

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Swift1204 at 2016-01-06 12:17:57
你的引物长度有多长?可能引物分子量太大,吸附不上离子柱。

分子量大约660x25,为什么导致吸附不上去啊?有办法改善吗,谢谢了!
3楼2016-01-06 12:35:41
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kitten1983aw

新虫 (小有名气)


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应该是分子太大了,进了柱子洗脱不下来。超过2000的分子应该用凝胶柱,或者分子筛来分析。
4楼2016-01-06 13:41:18
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大饼先生

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by kitten1983aw at 2016-01-06 13:41:18
应该是分子太大了,进了柱子洗脱不下来。超过2000的分子应该用凝胶柱,或者分子筛来分析。

我之前测的样分子量也大的,就比这个样少三个碱基对,前面的样能走出来,这个样根本走不出来,换了C18柱方法也没走出来,唉!
5楼2016-01-06 13:57:07
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Swift1204

新虫 (小有名气)


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你的剃度有问题没?20多碱基的应该是没问题,50以上可能会有问题!

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6楼2016-01-06 14:23:39
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大饼先生

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Swift1204 at 2016-01-06 14:23:39
你的剃度有问题没?20多碱基的应该是没问题,50以上可能会有问题!

梯度没问题,一起做的,前面的样可以,就这个样不行,又做了一次也不行,我就奇了怪了
7楼2016-01-06 14:28:58
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Swift1204

新虫 (小有名气)


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你确定合成出来的没有问题?

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8楼2016-01-06 14:34:17
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大饼先生

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by Swift1204 at 2016-01-06 14:34:17
你确定合成出来的没有问题?

木有问题,找了两个地方合成,国内和国外,检测纯度都没走出峰,愁死我了。。。。。
9楼2016-01-06 14:43:00
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Swift1204

新虫 (小有名气)


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你们找合成公司合成,为什么要纯化?

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10楼2016-01-06 14:47:34
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