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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 3'RACE求助
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 3'RACE求助 已有4人参与

大家的3‘RACE的反应体系是什么啊？我的一直跑不出来。。。
我是10微升rTaq酶，8.5微升水，各0.5的接头引物，内外引物和模板（感觉是不是模板加的少了，原来师姐用这个体系跑出来过）。
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1楼 2016-01-06 10:03:18
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hmz2007

银虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-04-10 23:03:37
我是一次一排梯度，温度差在八度左右，用普通taq 酶的商品化mix ，还是很快的，有时候会有错配，难免的，巢式扩增，一般第二次就能看见条带了

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6楼2016-01-07 13:55:54
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普通回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
大神在哪里~~求安慰!!
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2楼2016-01-06 20:05:06
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hmz2007

银虫 (正式写手)
巢式PCR 基本都能出来

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3楼2016-01-06 23:59:23
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hmz2007

银虫 (正式写手)
我一般做梯度加巢式PCR ，目前只有两次失败，反转录用的接头型oligodt 引物直接合成，然后反转录，就很多模板了

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4楼2016-01-07 00:01:33
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hmz2007 at 2016-01-07 00:01:33
我一般做梯度加巢式PCR ，目前只有两次失败，反转录用的接头型oligodt 引物直接合成，然后反转录，就很多模板了

我前面工作和你一样的，只是扩增用的两轮TD。。。我要不也试试普通PCR
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5楼2016-01-07 10:23:47
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hmz2007 at 2016-01-07 13:55:54
我是一次一排梯度，温度差在八度左右，用普通taq 酶的商品化mix ，还是很快的，有时候会有错配，难免的，巢式扩增，一般第二次就能看见条带了

确实是啊，我今天也试了一下，虽然不是我的目的条带，但最起码有带了
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7楼2016-01-07 17:43:38
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
条带是有了，可是和我预测的不一样大，我是用转录组的数据预测的。
试了两对引物，还都是一样大的。。。除了测序比对一下，还可能是因为什么呢？
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8楼2016-01-08 19:23:25
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xufengnbu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用LaTaq试试哈！高保真酶

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why is the way to success
9楼2016-01-09 00:34:13
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by xufengnbu at 2016-01-09 00:34:13
用LaTaq试试哈！高保真酶

有是有，但是我现在巢式PCR不做TD跑出来了，虽然与转录组预测不一样，但是我想先测序看看，毕竟两个引物跑出来一样的
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10楼2016-01-09 10:10:55
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