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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 3'RACE求助 已有4人参与

大家的3‘RACE的反应体系是什么啊?我的一直跑不出来。。。
我是10微升rTaq酶,8.5微升水,各0.5的接头引物,内外引物和模板(感觉是不是模板加的少了,原来师姐用这个体系跑出来过)。
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hmz2007

银虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-04-10 23:03:37
我是一次一排梯度,温度差在八度左右,用普通taq 酶的商品化mix ,还是很快的,有时候会有错配,难免的,巢式扩增,一般第二次就能看见条带了

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6楼2016-01-07 13:55:54
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

大神在哪里~~求安慰!!
2楼2016-01-06 20:05:06
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hmz2007

银虫 (正式写手)

3楼2016-01-06 23:59:23
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hmz2007

银虫 (正式写手)

我一般做梯度加巢式PCR ,目前只有两次失败,反转录用的接头型oligodt 引物直接合成,然后反转录,就很多模板了

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4楼2016-01-07 00:01:33
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hmz2007 at 2016-01-07 00:01:33
我一般做梯度加巢式PCR ,目前只有两次失败,反转录用的接头型oligodt 引物直接合成,然后反转录,就很多模板了

我前面工作和你一样的,只是扩增用的两轮TD。。。我要不也试试普通PCR
5楼2016-01-07 10:23:47
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by hmz2007 at 2016-01-07 13:55:54
我是一次一排梯度,温度差在八度左右,用普通taq 酶的商品化mix ,还是很快的,有时候会有错配,难免的,巢式扩增,一般第二次就能看见条带了

确实是啊,我今天也试了一下,虽然不是我的目的条带,但最起码有带了
7楼2016-01-07 17:43:38
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

条带是有了,可是和我预测的不一样大,我是用转录组的数据预测的。
试了两对引物,还都是一样大的。。。除了测序比对一下,还可能是因为什么呢?
8楼2016-01-08 19:23:25
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xufengnbu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用LaTaq试试哈!高保真酶

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why is the way to success
9楼2016-01-09 00:34:13
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by xufengnbu at 2016-01-09 00:34:13
用LaTaq试试哈!高保真酶

有是有,但是我现在巢式PCR不做TD跑出来了,虽然与转录组预测不一样,但是我想先测序看看,毕竟两个引物跑出来一样的
10楼2016-01-09 10:10:55
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