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溪偌飘纤

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取植物叶片DNA,RNA去除干净了没?求大神指导 已有2人参与

图为mCTAB法提取苔藓植物DNA后的总DNA胶图

1为bufferB预热一小时后加1ul 10mg/ml RNase
2为bufferB预热一小时后加4ul 10mg/ml RNase
3为异丙醇沉淀半小时离心弃上清后加100ul 100mg/L RNase
4为不添加RNase

我是想问,红框里的条带代表什么,是指没有去除完毕的RNA吗?是不是RNase不太好?求大神指导

提取植物叶片DNA,RNA去除干净了没?求大神指导
RNase测试1.png
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溪偌飘纤

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 溪偌飘纤 at 2016-01-04 10:38:36
图为mCTAB法提取苔藓植物DNA后的总DNA胶图

1为bufferB预热一小时后加1ul 10mg/ml RNase
2为bufferB预热一小时后加4ul 10mg/ml RNase
3为异丙醇沉淀半小时离心弃上清后加100ul 100mg/L RNase
4为不添加RNase
...

分光光度计测得值及胶图
提取植物叶片DNA,RNA去除干净了没?求大神指导-1


提取植物叶片DNA,RNA去除干净了没?求大神指导-2



发自小木虫Android客户端
2楼2016-01-04 12:46:44
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溪偌飘纤

新虫 (初入文坛)

3楼2016-01-04 23:13:39
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xiangbchen

金虫 (正式写手)

胶孔处有滞留的带,说明蛋白去除不彻底。

发自小木虫Android客户端
4楼2016-01-05 02:07:06
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溪偌飘纤

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xiangbchen at 2016-01-05 02:07:06
胶孔处有滞留的带,说明蛋白去除不彻底。

那RNA去彻底了吗,下图4为没加RNase的胶图

发自小木虫Android客户端
5楼2016-01-05 09:10:55
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
最底下那团一般就是RNA,RNA没有完全去除
6楼2016-01-05 12:18:31
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qinqqjiajia

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
溪偌飘纤(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:33:52
看图片胶孔处有亮带,应该是存在蛋白污染;最前面的弥散带应该是RNA污染的存在了
7楼2016-01-05 12:59:44
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反应链

新虫 (正式写手)

3% CTAB DNA extracion protocol
(modified from Zeng et al. 2002, ACta Botanica Sinica 44; 694-697)

1. washing out polysaccharides with CTAB-free buffer from homogenate.
2. increasing the percentage of CTAB in extraction medium.
3. using high concentration salts pior to DNA precipitation with isopanol.

提取植物叶片DNA,RNA去除干净了没?求大神指导-3
8楼2016-01-05 21:23:32
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