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家喻户晓

新虫 (小有名气)

[求助] 菌检 已有1人参与

我之前用一对引物58℃扩启动子,也扩出来了,现在连T载,挑阳性克隆,为什么一直没有,是不是加有酶切位点的引物的退火温度应该提高一点啊!

发自小木虫Android客户端
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ayumi7667

新虫 (初入文坛)

???f?????u?????????e???x????????{??Y??????|?????????????????x???????colony PCR ?????????LB plate?? PCR????insert????L?????????? ??_??????????????????|?w

????С???Android?????
8楼2015-12-30 22:02:01
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科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
T载体连接出现假阳性是常有的事,PCR只要有条带大小正确基本没问题,主要是纯化回收过程中,DNA一定要纯,连接时片段至少是载体的3倍以上。
生物科学
2楼2015-12-30 20:11:08
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反应链

新虫 (正式写手)

Can you show me your agarose gel eletrophoresis of PCR products? Which polymerase did you use? Was there one A added at 3'-termini?
3楼2015-12-30 20:34:46
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ayumi7667

新虫 (初入文坛)

???????taq????????м?a?????????????{??Y????????? insert??3 ?|?w??1??λ??mole

????С???Android?????
4楼2015-12-30 20:54:29
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