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宋宋6

新虫 (初入文坛)

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[交流] 高保真酶已有9人参与

最近总高保真酶primestar，死活扩不出来。怀疑是不是我程序的问题。你们都是怎么设置程序的？而且还遇到一个问题是，pcr为什么有时候出带，有时候不出带呢。

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1楼 2015-12-23 19:11:15

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宋宋6

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by X小天T at 2015-12-23 21:02:17
程序的话按照说明书上的一般没问题，只不过不同的引物所需要的退火温度不同，所以，最好先用梯度PCR，普通的酶，确定最佳退火温度，然后再用高保真酶P目的片段。还有，你的目的条带是不是特别长，要根据不同长度设置 ...

我想知道是不是我具体的程序错了。说明书上没有预变形，是不是没有预变形，也没有终延伸那一步。说明书上虽然没有，这应该是公认的吧

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6楼2015-12-25 10:45:47

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X小天T

金虫 (正式写手)

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程序的话按照说明书上的一般没问题，只不过不同的引物所需要的退火温度不同，所以，最好先用梯度PCR，普通的酶，确定最佳退火温度，然后再用高保真酶P目的片段。还有，你的目的条带是不是特别长，要根据不同长度设置延伸时间（我们用的TAKARA的酶，是说明书上的的时间的1.5倍）。对于不出条带原因是多方面的，具体原因具体分析（额...感觉想废话一样，不过确实是这样）

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2楼2015-12-23 21:02:17

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