24小时热门版块排行榜    

查看: 4868  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

宋宋6

新虫 (初入文坛)

[交流] 高保真酶 已有9人参与

最近总高保真酶primestar,死活扩不出来。怀疑是不是我程序的问题。你们都是怎么设置程序的?而且还遇到一个问题是,pcr为什么有时候出带,有时候不出带呢。

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

足下客

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
保真性越好,扩增效率越低。高保真酶就是不好扩,而且有些基因本身就是不好扩的。
4楼2015-12-24 14:08:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

X小天T

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
程序的话按照说明书上的一般没问题,只不过不同的引物所需要的退火温度不同,所以,最好先用梯度PCR,普通的酶,确定最佳退火温度,然后再用高保真酶P目的片段。还有,你的目的条带是不是特别长,要根据不同长度设置延伸时间(我们用的TAKARA的酶,是说明书上的的时间的1.5倍)。对于不出条带原因是多方面的,具体原因具体分析(额...感觉想废话一样,不过确实是这样)
2楼2015-12-23 21:02:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scofield111

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
退火温度做梯度,真有钱,prime star 贵死

发自小木虫Android客户端
3楼2015-12-24 11:57:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Huobol

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也有类似情况,有的基因很难扩;还有,官方的程序,我从来没有成功过,都是用普通PCR的程序P的,记得PrimeStar官方的程序说是变性时间5s或15s,好短,退火时间好像也非常短,反正,我是扩不出来,同实验室的也是,最后都是用自己普通的程序P的,效果还可以。
让羽毛再飞一会儿
5楼2015-12-25 09:29:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 312求调剂 +8 上岸吧ZJY 2026-03-22 12/600 2026-03-26 18:49 by muchong357
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +5 YangTyu1 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:27 by 猫咪猫咪呀
[考研] 274求调剂 +14 顾九笙要谦虚 2026-03-24 20/1000 2026-03-26 18:15 by 乐呵呵的追梦人
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 7/350 2026-03-26 16:07 by 不吃魚的貓
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-26 4/200 2026-03-26 16:00 by 不吃魚的貓
[考研] 297求调剂 +6 田洪有 2026-03-26 6/300 2026-03-26 15:55 by 不吃魚的貓
[考研] 材料调剂 5+3 想要一壶桃花水 2026-03-25 8/400 2026-03-26 09:51 by 王小欠i
[考研] 打过很多竞赛,085406控制工程300分,求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 材料求调剂 +4 .m.. 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:30 by peike
[考研] 材料学硕333求调剂 +4 北道巷 2026-03-24 4/200 2026-03-25 14:16 by mapenggao
[考研] 286求调剂 +11 Faune 2026-03-21 11/550 2026-03-25 10:11 by 雾散后相遇lc
[考研] 07化学280分求调剂 +7 722865 2026-03-23 7/350 2026-03-25 09:29 by aa331100
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料,材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 7/350 2026-03-24 11:23 by 种大树
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见