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RNA世界

铁虫 (初入文坛)

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[求助] DNA粗提取的问题

我在做番茄的稳定转基因。
然后现在是需要提取DNA做PCR鉴定
我的提取方法大概是这样的。
在1.5ml离心管里加100微升的无菌水，然后加入植物叶片样品，研磨匀浆
加入150微升的细胞裂解液，成分我忘了，含有EDTA和Tris等
然后加入150微升异丙醇。-20度沉淀DNA，大概一个小时
14000rpm 2分钟离心，取上清
用75%乙醇洗两次，每次都是14000rpm 2分钟
最后，晾干后，用dd水溶解。
然后现在的情况是PCR后没有条带。我怀疑是DNA提取的问题。
这个过程只是粗提，并没有纯化，因为PCR好像也不要求样品有多高的纯度
想请大家帮我看看，问题可能会出在哪里呢？

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谋事在人，成事在天

1楼 2015-12-19 18:44:22

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引用回帖:

4楼: Originally posted by lzq_112233 at 2015-12-26 13:22:33
用你说的方法，仅仅是粗提，DNA量很小，用于PCR应该没有问题，如果没有P出来，考虑一下引物的问题，或者在你的方法上少做更改，在裂解后，吸上清，24:1氯仿异戊醇抽提一次，沉淀半小时后面的就一样了
...

谢谢！不胜感激

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