| 查看: 1424 | 回复: 6 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
RNA世界铁虫 (初入文坛)
|
[求助]
DNA粗提取的问题
|
||
|
我在做番茄的稳定转基因。 然后现在是需要提取DNA做PCR鉴定 我的提取方法大概是这样的。 在1.5ml离心管里加100微升的无菌水，然后加入植物叶片样品，研磨匀浆 加入150微升的细胞裂解液，成分我忘了，含有EDTA和Tris等 然后加入150微升异丙醇。-20度沉淀DNA，大概一个小时 14000rpm 2分钟 离心，取上清 用75%乙醇洗两次，每次都是14000rpm 2分钟 最后，晾干后，用dd水溶解。 然后现在的情况是PCR后没有条带。我怀疑是DNA提取的问题。 这个过程只是粗提，并没有纯化，因为PCR好像也不要求样品有多高的纯度 想请大家帮我看看，问题可能会出在哪里呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
拟解决的关键科学问题还要不要写
已经有8人回复
-
最失望的一年
已经有12人回复
-
存款400万可以在学校里躺平吗
已经有29人回复
-
求推荐英文EI期刊
已经有5人回复
-
请教限项目规定
已经有4人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有20人回复
-
26申博
已经有3人回复
-
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有10人回复
-
基金申报
已经有6人回复
-
疑惑？
已经有5人回复
lzq_112233
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 854.5
- 红花: 2
- 帖子: 84
- 在线: 24.5小时
- 虫号: 2750465
- 注册: 2013-10-24
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
|
用你说的方法，仅仅是粗提，DNA量很小，用于PCR应该没有问题，如果没有P出来，考虑一下引物的问题，或者在你的方法上少做更改，在裂解后，吸上清，24:1氯仿异戊醇抽提一次，沉淀半小时后面的就一样了 发自小木虫Android客户端 |
4楼2015-12-26 13:22:33
yvonne9044
新虫 (正式写手)
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 1894.6
- 红花: 11
- 帖子: 566
- 在线: 95.8小时
- 虫号: 2302493
- 注册: 2013-02-26
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2015-12-19 23:24:57
RNA世界
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 18.2
- 散金: 10
- 帖子: 45
- 在线: 9.9小时
- 虫号: 4282842
- 注册: 2015-12-11
- 性别: GG
- 专业: 植物进化生物学
3楼2015-12-20 00:48:11
RNA世界
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 18.2
- 散金: 10
- 帖子: 45
- 在线: 9.9小时
- 虫号: 4282842
- 注册: 2015-12-11
- 性别: GG
- 专业: 植物进化生物学
5楼2015-12-29 10:44:09