| 查看: 1553 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
RNA世界铁虫 (初入文坛)
|
[求助]
DNA粗提取的问题
|
|
|
我在做番茄的稳定转基因。 然后现在是需要提取DNA做PCR鉴定 我的提取方法大概是这样的。 在1.5ml离心管里加100微升的无菌水，然后加入植物叶片样品，研磨匀浆 加入150微升的细胞裂解液，成分我忘了，含有EDTA和Tris等 然后加入150微升异丙醇。-20度沉淀DNA，大概一个小时 14000rpm 2分钟 离心，取上清 用75%乙醇洗两次，每次都是14000rpm 2分钟 最后，晾干后，用dd水溶解。 然后现在的情况是PCR后没有条带。我怀疑是DNA提取的问题。 这个过程只是粗提，并没有纯化，因为PCR好像也不要求样品有多高的纯度 想请大家帮我看看，问题可能会出在哪里呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
复试调剂，一志愿郑州大学材料与化工289分
已经有19人回复
-
086003调剂求助
已经有7人回复
-
考研调剂-材料类-284
已经有19人回复
-
求调剂材料科学与工程一志愿985初试365分
已经有4人回复
-
一志愿西南大学生物学学硕344 求生物学相关调剂/生物与医药
已经有6人回复
-
314求调剂
已经有5人回复
-
材料化工总分334求调剂
已经有10人回复
-
求调剂
已经有3人回复
-
0860004 求调剂 309分
已经有4人回复
-
一志愿厦大生物学332求调剂
已经有6人回复
RNA世界
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 18.2
- 散金: 10
- 帖子: 45
- 在线: 9.9小时
- 虫号: 4282842
- 注册: 2015-12-11
- 性别: GG
- 专业: 植物进化生物学
3楼2015-12-20 00:48:11
yvonne9044
新虫 (正式写手)
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 1894.6
- 红花: 11
- 帖子: 566
- 在线: 95.8小时
- 虫号: 2302493
- 注册: 2013-02-26
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2015-12-19 23:24:57
lzq_112233
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 854.5
- 红花: 2
- 帖子: 84
- 在线: 24.5小时
- 虫号: 2750465
- 注册: 2013-10-24
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
|
用你说的方法，仅仅是粗提，DNA量很小，用于PCR应该没有问题，如果没有P出来，考虑一下引物的问题，或者在你的方法上少做更改，在裂解后，吸上清，24:1氯仿异戊醇抽提一次，沉淀半小时后面的就一样了 发自小木虫Android客户端 |
4楼2015-12-26 13:22:33
RNA世界
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 18.2
- 散金: 10
- 帖子: 45
- 在线: 9.9小时
- 虫号: 4282842
- 注册: 2015-12-11
- 性别: GG
- 专业: 植物进化生物学
5楼2015-12-29 10:44:09
