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wanglixia815

新虫 (正式写手)

[求助] 高手进来看看,帮忙解决问题,非常感谢 已有5人参与

我做DNA提取和PCR,我的DNeasy plant mini kit 和primer都是2014年2月买的,引物稀释之后,一直在零下20度放着,今天做PCR。发现marker是清楚的。但是样品条带很模糊。。是不引物降解了?第一个图是用DNA样品跑的。带很清楚,应该mini kit是没有问题,还可以继续使用,但是第二张图pcr产物,marker清楚。但是样品条带很模糊,然后我用引物跑了一遍,第二张第二行,那四条带,也很模糊,是不说明引物降解了?还是还有别的问题?

高手进来看看,帮忙解决问题,非常感谢


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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
18楼: Originally posted by wanglixia815 at 2015-12-20 23:44:28
这就是灭过以后做的,但是我在稀释引物的时候,mili q 没有灭,是不这个原因
...

我觉得可能性很小。。一般试剂盒附带的无菌水只要不是经常用 又隔很久的话 都不会有什么问题。 你有重复试验吗 是重复了都一样情况么? 不过话说你这间隔已经快两年时间了还用原来的稀释引物啊。。引物母液应该有吧 重新稀释一下比较保险吧。。如果是我的话,我会重复一下实验 同时拿个引物母液稀释一下一起PCR,这样就知道问题出在哪了,如果条带还是不行,那问题应该出在你的体系和反应条件了,你试试。
23楼2015-12-21 17:48:35
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

引物没有问题,片段也扩增出来了,可能是制胶过程中胶冷却的不均匀造成的,建议重新做快胶电泳时间跑长点。
2楼2015-12-19 12:58:22
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2015-12-19 12:58:22
引物没有问题,片段也扩增出来了,可能是制胶过程中胶冷却的不均匀造成的,建议重新做快胶电泳时间跑长点。

但是j我的marker很清楚呀,胶有问题,marker应该也不清楚吧

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3楼2015-12-19 14:59:47
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

对了,用mili q water没有问题吧,在做pcr的时候,

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4楼2015-12-19 15:11:49
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