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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR后琼脂糖凝胶电泳的胶浓度与DNA ladder 大小有什么关系呢？
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JULIA606

新虫 (小有名气)

[求助] PCR后琼脂糖凝胶电泳的胶浓度与DNA ladder 大小有什么关系呢？ 已有7人参与

各位大侠，新手最近因实验需要基因鉴定进行PCR后电泳，目的基因在290-370bp之间，目前用的100bp ladder,1%琼脂糖，跑了几次后发现 ladder在目的段跑的不是很开，区分不大，不知道琼脂糖凝胶电泳的胶浓度与DNA ladder 大小有什么关系呢？鉴于经验有限，再次请教各位，期待大家的建议与指导~~！~O(∩_∩)O~
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1楼 2015-12-15 20:15:48
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JULIA606

新虫 (小有名气)
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17楼: Originally posted by 1202ld at 2015-12-17 12:50:10
50bp 胶浓度要3%或以上，不然成一堆分不开
...

“成一堆分不开”指的是ladder跑不开吗？可是之前1%的胶跑的确实比现在能看多了。。。我需要的鉴别条带差别70bp
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30楼2015-12-17 18:28:14
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JULIA606

新虫 (小有名气)
引用回帖:
31楼: Originally posted by 1202ld at 2015-12-17 19:54:53
这里的50 bp指的是50bp 的marker
...

明白滴，亲，so?
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32楼2015-12-17 20:17:35
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JULIA606

新虫 (小有名气)
引用回帖:
33楼: Originally posted by 暮色西荷 at 2015-12-17 23:43:34
学体育的吧

我们确实不是专做分子生物学实验的，有问题在此请教讨论，也是想通过大家的经验指导得到满意的结果，有必要这么刻薄吗？！
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38楼2015-12-18 08:57:22
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JULIA606

新虫 (小有名气)
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35楼: Originally posted by 暮色西荷 at 2015-12-18 00:08:15
1、DNA maker是已知大小的DNA混合物，起对照指示目的条带大小的，就像你的目的条带不会随着胶浓度变化一样，它的各条带大小是固定的；2、提高胶浓度是为了减小胶的孔径，这样小的DNA能快速通过，而大的通过的慢，起 ...

首先，还是感谢一下你的耐心解释。。我现在纠结于胶浓度的问题是因为我们的目的是为了区分290bp-370bp及其区间内的条带，所以想让marker跑的更开一点，也是为了优化实验。还有一点建议：这年头英语在哪都重要，细节亦然。
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39楼2015-12-18 09:05:53
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JULIA606

新虫 (小有名气)
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37楼: Originally posted by oliviashane at 2015-12-18 01:45:46
你轉了多久啊？微波爐功率大的話就時間短些，你可以30s一次，根據溶膠情況決定轉幾次。或者你試試保鮮膜只封一半燒杯口，另一半敞開。再有可能就是你制膠的燒杯過小了，換個大點的試試。
...

恩，会注意下溶胶过程，短时反复多次看看，3Q~
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40楼2015-12-18 09:07:03
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JULIA606

新虫 (小有名气)
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41楼: Originally posted by 暮色西荷 at 2015-12-18 10:30:20
首先朋友用我的帐号回复的，看到后立即申请版主删除了，至于为什么没删除掉我也不知道，我先替她说声抱歉，但是她也只是开个玩笑，没必要用“刻薄”来形容吧？；其次，我半夜打那么多字也是真心想帮助你，我们来论 ...

首先我也表达了对你（或者你朋友的）感谢，其次我认为自己的言辞说不上是冷言冷语吧，只是真心的想大家都有提高，学历是一方面，但更重要的是人品。如果我的表达让你或者你朋友有了歧义，也并非是我的本意，怎么理解真的要看人了。
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42楼2015-12-18 11:27:08
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JULIA606

新虫 (小有名气)
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43楼: Originally posted by joeming123 at 2015-12-18 16:17:52
胶有煮好么？ 一般是煮到没有可见固体，像你这样，总是看不清ladder，不妨试试 多煮沸几次。  还有胶粉最好买点，比较好的。...

谢谢 我们的胶粉是好的，现在都是煮80ml，就是感觉微波控制不好，煮到透明态时胶液总会减少，剩50-60ml左右，现在是用保鲜膜封住烧杯口，有用枪头扎眼、也有留口尝试，都是这样。按照有人建议的补水至原重试过，感觉并没有溶后直接凝胶的效果好。我用1%和1.5%的浓度制胶的效果还可以，ladder比较好看，就是不知道为什么按照小片段高浓度胶这一规律就不太对头。。。现在算是能得到比较好看的结果，再次感谢啦~O(∩_∩)O~
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45楼2015-12-19 10:13:09
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