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jldu0606

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 酿酒酵母营养缺陷筛选标记可否用于基因组重组

鄙人手头有一株营养缺陷型酿酒酵母(his3, leu2, trp1, ura3)。
欲构建以Trp和His为筛选标记的质粒,用于表达外源目的基因,并希望以这两个筛选标记为重组位点线性化质粒。
但是文献检索过程中发现很少有类似的实验可供参考,因此上来请教各位大侠是否有类似的经验可以指教一下,能够有细节信息最好不过!
在此谢过去了……
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jldu0606

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by biosci at 2015-12-17 16:09:02
没有同源臂,你怎么整合上去呢

确实担心这个问题,但是URA3这个筛选标记不是也可以直接线性化并整合到基因组么?
另外,在网上看到一些资料中这样说:
酵母基因组整合质粒(Yeast integrating plasmid, YIP)
(1).Trp筛选标志 (2).Ura筛选标志 (3).Leu筛选标志 (4).His筛选标志 (5).G418筛选标志
此类质粒经酶切线性化后可整合到酵母细胞基因组中
用途: a.基因取代或基因删除   b.稳定型表达元件的整合(integration)和敲入(knock in)
似乎也是说明这些筛选标记可以用于线性化并整合到基因组中!
6楼2015-12-17 16:15:30
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jldu0606

铁杆木虫 (著名写手)

没人了解么?自己先顶一下……呵呵
2楼2015-12-16 17:04:12
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


这些不都是商品化质粒么?都有现成的啊

发自小木虫Android客户端
3楼2015-12-16 20:03:38
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jldu0606

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2015-12-16 20:03:38
这些不都是商品化质粒么?都有现成的啊

呵呵呵,其实我的问题是,TRP及HIS标签可否直接线性化用于转化相应营养缺陷型(TRP OR HIS)酿酒酵母?谢谢
4楼2015-12-17 15:09:20
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