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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酿酒酵母营养缺陷筛选标记可否用于基因组重组
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jldu0606

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 酿酒酵母营养缺陷筛选标记可否用于基因组重组

鄙人手头有一株营养缺陷型酿酒酵母(his3, leu2, trp1, ura3)。
欲构建以Trp和His为筛选标记的质粒，用于表达外源目的基因，并希望以这两个筛选标记为重组位点线性化质粒。
但是文献检索过程中发现很少有类似的实验可供参考，因此上来请教各位大侠是否有类似的经验可以指教一下，能够有细节信息最好不过！
在此谢过去了……
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1楼 2015-12-15 15:00:32
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jldu0606

铁杆木虫 (著名写手)
没人了解么？自己先顶一下……呵呵
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2楼2015-12-16 17:04:12
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
这些不都是商品化质粒么？都有现成的啊

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3楼2015-12-16 20:03:38
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jldu0606

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2015-12-16 20:03:38
这些不都是商品化质粒么？都有现成的啊

呵呵呵，其实我的问题是，TRP及HIS标签可否直接线性化用于转化相应营养缺陷型（TRP OR HIS）酿酒酵母？谢谢
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4楼2015-12-17 15:09:20
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
没有同源臂，你怎么整合上去呢

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5楼2015-12-17 16:09:02
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jldu0606

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by biosci at 2015-12-17 16:09:02
没有同源臂，你怎么整合上去呢

确实担心这个问题，但是URA3这个筛选标记不是也可以直接线性化并整合到基因组么？
另外，在网上看到一些资料中这样说：
酵母基因组整合质粒(Yeast integrating plasmid, YIP)
(1).Trp筛选标志 (2).Ura筛选标志 (3).Leu筛选标志 (4).His筛选标志 (5).G418筛选标志
此类质粒经酶切线性化后可整合到酵母细胞基因组中
用途: a.基因取代或基因删除   b.稳定型表达元件的整合(integration)和敲入(knock in)
似乎也是说明这些筛选标记可以用于线性化并整合到基因组中！
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6楼2015-12-17 16:15:30
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
那是载体其它部分带有整合元件

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7楼2015-12-17 16:39:14
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茄子的茄

铜虫 (初入文坛)
想问楼主缺陷型的酵母菌株哪里可以买到？最近在找用于表达外源基因的酿酒酵母，需要基因缺陷型的，楼主有可以共享的信息么？
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8楼2016-03-27 00:06:25
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jldu0606

铁杆木虫 (著名写手)
找论文！

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9楼2016-03-27 07:10:47
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kingjazz23

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 茄子的茄 at 2016-03-27 00:06:25
想问楼主缺陷型的酵母菌株哪里可以买到？最近在找用于表达外源基因的酿酒酵母，需要基因缺陷型的，楼主有可以共享的信息么？

Thermo官网就有

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10楼2016-05-04 17:04:37
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