应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 想要透析纯化一个蛋白，求有经验的大神来教教小弟
61/1返回列表
查看: 2199  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

o隐形人o

新虫 (初入文坛)

[求助] 想要透析纯化一个蛋白，求有经验的大神来教教小弟 已有3人参与

目前大概200ml经过超声破碎细胞获得的粗酶液，看到文献中有用透析的方法进行纯化蛋白的。但是从来没有做过，实验室师兄师姐也没做过类似工作。求哪位大神有比较丰富详细的操作经验来指导下~~~
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-12-14 14:18:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
o隐形人o: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-03-27 20:22:51
透析法纯化，效果不是很好，纯度也不好，比如你的蛋白50kd的，你选用10kd的膜截留，大于10kd的蛋白就在透析膜里面，小于的杂蛋白就除去了，或者你的蛋白2kd，你就选用10kd的透析膜，目标就在透析液中，大于10kd的杂蛋白就在透析袋中。这个效果不好，还不如分级盐析啊，就是溶液加不同量的硫酸铵，然后，每个浓度收集沉淀，溶解，看你的目标在那个里面。纯度也不高，要高纯度的，还是层析比较好，比如疏水的，离子交换的等等，祝顺利。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-12-14 15:02:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乘风浮云

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
粗酶液里还有多少你的目标蛋白，你的目标蛋白的分子量多大，要纯化到什么程度？这些信息都没有，实验室透析只能除盐及小分子的物质，你这个问题让被人没法回答
赞一下 回复此楼
3楼2015-12-15 16:08:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

北国佳人

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的要求还没具体说明---大致猜测如下----粗酶液--硫酸铵沉淀---然后沉淀复溶---然后用透析的方法去除硫酸铵---PEG浓缩目标酶蛋白
赞一下 回复此楼
努力的小蜜蜂
4楼2015-12-20 12:34:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

o隐形人o

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-12-14 15:02:38
透析法纯化，效果不是很好，纯度也不好，比如你的蛋白50kd的，你选用10kd的膜截留，大于10kd的蛋白就在透析膜里面，小于的杂蛋白就除去了，或者你的蛋白2kd，你就选用10kd的透析膜，目标就在透析液中，大于10kd的杂 ...

谢谢大神，做了一段时间，摸索了下条件，但效果一直不是很好，而且透析过程中酶活下降厉害= =。。在考虑别的方法了
赞一下 回复此楼
5楼2016-03-27 20:24:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

o隐形人o

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 北国佳人 at 2015-12-20 12:34:16
你的要求还没具体说明---大致猜测如下----粗酶液--硫酸铵沉淀---然后沉淀复溶---然后用透析的方法去除硫酸铵---PEG浓缩目标酶蛋白

谢谢。。感觉透析过程酶活损失太多了= =在考虑别的方法了
赞一下 回复此楼
6楼2016-03-27 20:24:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 o隐形人o 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 言之凿凿，8月21号(明天)放榜 +14 医学老男孩 2026-08-20 16/800 2026-08-20 15:47 by LNP@mRNA
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +17 基诺咪客 2026-08-17 21/1050 2026-08-20 14:54 by 昝占全2025
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +16 Ldrop2023 2026-08-13 20/1000 2026-08-20 11:07 by xskun
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 21/1050 2026-08-20 10:37 by Vivilian
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭