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o隐形人o

新虫 (初入文坛)

[求助] 想要透析纯化一个蛋白,求有经验的大神来教教小弟已有3人参与

目前大概200ml经过超声破碎细胞获得的粗酶液,看到文献中有用透析的方法进行纯化蛋白的。但是从来没有做过,实验室师兄师姐也没做过类似工作。求哪位大神有比较丰富详细的操作经验来指导下~~~
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北国佳人

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的要求还没具体说明---大致猜测如下----粗酶液--硫酸铵沉淀---然后沉淀复溶---然后用透析的方法去除硫酸铵---PEG浓缩目标酶蛋白
努力的小蜜蜂
4楼2015-12-20 12:34:16
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查看全部 6 个回答

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
o隐形人o: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-03-27 20:22:51
透析法纯化,效果不是很好,纯度也不好,比如你的蛋白50kd的,你选用10kd的膜截留,大于10kd的蛋白就在透析膜里面,小于的杂蛋白就除去了,或者你的蛋白2kd,你就选用10kd的透析膜,目标就在透析液中,大于10kd的杂蛋白就在透析袋中。这个效果不好,还不如分级盐析啊,就是溶液加不同量的硫酸铵,然后,每个浓度收集沉淀,溶解,看你的目标在那个里面。纯度也不高,要高纯度的,还是层析比较好,比如疏水的,离子交换的等等,祝顺利。
2楼2015-12-14 15:02:38
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乘风浮云

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
粗酶液里还有多少你的目标蛋白,你的目标蛋白的分子量多大,要纯化到什么程度?这些信息都没有,实验室透析只能除盐及小分子的物质,你这个问题让被人没法回答
3楼2015-12-15 16:08:16
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o隐形人o

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-12-14 15:02:38
透析法纯化,效果不是很好,纯度也不好,比如你的蛋白50kd的,你选用10kd的膜截留,大于10kd的蛋白就在透析膜里面,小于的杂蛋白就除去了,或者你的蛋白2kd,你就选用10kd的透析膜,目标就在透析液中,大于10kd的杂 ...

谢谢大神,做了一段时间,摸索了下条件,但效果一直不是很好,而且透析过程中酶活下降厉害= =。。在考虑别的方法了
5楼2016-03-27 20:24:15
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