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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 想要透析纯化一个蛋白，求有经验的大神来教教小弟
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o隐形人o

新虫 (初入文坛)

[求助] 想要透析纯化一个蛋白，求有经验的大神来教教小弟 已有3人参与

目前大概200ml经过超声破碎细胞获得的粗酶液，看到文献中有用透析的方法进行纯化蛋白的。但是从来没有做过，实验室师兄师姐也没做过类似工作。求哪位大神有比较丰富详细的操作经验来指导下~~~
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1楼 2015-12-14 14:18:59
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
o隐形人o: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-03-27 20:22:51
透析法纯化，效果不是很好，纯度也不好，比如你的蛋白50kd的，你选用10kd的膜截留，大于10kd的蛋白就在透析膜里面，小于的杂蛋白就除去了，或者你的蛋白2kd，你就选用10kd的透析膜，目标就在透析液中，大于10kd的杂蛋白就在透析袋中。这个效果不好，还不如分级盐析啊，就是溶液加不同量的硫酸铵，然后，每个浓度收集沉淀，溶解，看你的目标在那个里面。纯度也不高，要高纯度的，还是层析比较好，比如疏水的，离子交换的等等，祝顺利。
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2楼2015-12-14 15:02:38
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乘风浮云

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
粗酶液里还有多少你的目标蛋白，你的目标蛋白的分子量多大，要纯化到什么程度？这些信息都没有，实验室透析只能除盐及小分子的物质，你这个问题让被人没法回答
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3楼2015-12-15 16:08:16
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北国佳人

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的要求还没具体说明---大致猜测如下----粗酶液--硫酸铵沉淀---然后沉淀复溶---然后用透析的方法去除硫酸铵---PEG浓缩目标酶蛋白
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努力的小蜜蜂
4楼2015-12-20 12:34:16
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o隐形人o

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-12-14 15:02:38
透析法纯化，效果不是很好，纯度也不好，比如你的蛋白50kd的，你选用10kd的膜截留，大于10kd的蛋白就在透析膜里面，小于的杂蛋白就除去了，或者你的蛋白2kd，你就选用10kd的透析膜，目标就在透析液中，大于10kd的杂 ...

谢谢大神，做了一段时间，摸索了下条件，但效果一直不是很好，而且透析过程中酶活下降厉害= =。。在考虑别的方法了
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5楼2016-03-27 20:24:15
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o隐形人o

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 北国佳人 at 2015-12-20 12:34:16
你的要求还没具体说明---大致猜测如下----粗酶液--硫酸铵沉淀---然后沉淀复溶---然后用透析的方法去除硫酸铵---PEG浓缩目标酶蛋白

谢谢。。感觉透析过程酶活损失太多了= =在考虑别的方法了
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6楼2016-03-27 20:24:52
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