24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 6216  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Mingle_Su

银虫 (小有名气)

[求助] CoIP/蛋白互作|| 阴性对照杂出条带 ||FLAG HA Triton 洗涤 原生质体瞬时表达 已有2人参与

阴性对照的也被沉淀下来了,一周的实验就这样废了,请各位资深朋友帮分析下原因。每个样品用了20ul带FLAG抗体的磁珠(sigma),孵育结合后用0.1%的Triton 100 洗涤4次,最后用50mM的Tris-HCl pH=7.5 洗涤,每次洗涤均用1mL的buffer。个人觉得应该不是珠子没洗干净,另外考虑蛋白直接结合磁珠,两个完全不相关的蛋白都可以结合磁珠更加不可能。只能想到以上两个比较直接原因,请各位高手指教。 具体问题见下图,谢谢!

CoIP/蛋白互作|| 阴性对照杂出条带 ||FLAG HA Triton 洗涤 原生质体瞬时表达
CoIP
回复此楼
Succeed
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

113226

银虫 (正式写手)

12楼2015-12-15 09:58:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

陈爱中

新虫 (小有名气)

反正你都过表达的,为什么不直接做体外pull-down?
2楼2015-12-13 11:19:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mofashishe

铜虫 (小有名气)

e81那个样品和flag抗体有交叉反应?

发自小木虫Android客户端
3楼2015-12-13 11:37:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mingle_Su

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 陈爱中 at 2015-12-13 11:19:35
反正你都过表达的,为什么不直接做体外pull-down?

原生质体过表达和原核过表达差挺多的。其实我同时在做酵母双杂交,BiFC 和共定位的实验,哈哈。
Succeed
4楼2015-12-13 13:32:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 申博自荐 +3 Linxia林夏 2026-04-13 3/150 2026-04-16 12:55 by 墨荷之露
[考研] 0854求调剂 +17 门路摸摸 2026-04-15 19/950 2026-04-16 10:24 by dick_runner
[考研] 一志愿华中农业071010,320求调剂 +12 困困困困坤坤 2026-04-14 14/700 2026-04-16 10:18 by beilsong20
[考研] 290调剂生物0860 +38 哇哈哈,。 2026-04-11 44/2200 2026-04-16 09:52 by cuisz
[考研] 恳请有学校收留 +6 柯淮然 2026-04-12 6/300 2026-04-16 07:23 by 学员JpLReM
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +6 喽哈加油 2026-04-13 6/300 2026-04-14 16:40 by zhouxiaoyu
[考研] 366求调剂 +11 不知名的小卅 2026-04-11 11/550 2026-04-14 15:50 by zs92450
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +18 振—TZ 2026-04-10 19/950 2026-04-14 10:34 by screening
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] 22408 352分求调剂 +5 努力的夏末 2026-04-09 5/250 2026-04-12 19:17 by wj165256
[考研] 电气专硕320求调剂 +6 小麻子111 2026-04-10 6/300 2026-04-12 10:54 by lemon6009
[找工作] 山东高校教师考核超级无底线,员工过不下去啦 +4 qut2026 2026-04-09 9/450 2026-04-12 00:54 by qut2026
[考研] 331求调剂 +5 王国帅 2026-04-11 5/250 2026-04-11 22:56 by 溪涧流水
[考研] 303求调剂 +14 SereinQ 2026-04-10 15/750 2026-04-11 20:43 by 蓝云思雨
[考研] 调剂求助 +6 果然有我 2026-04-11 7/350 2026-04-11 16:22 by 明月此时有
[考研] 297求调剂 +9 Kwgyz 2026-04-09 9/450 2026-04-11 10:09 by zhq0425
[考研] 083200 305分 求二轮调剂 不接受跨专业 +9 Claireyyyy 2026-04-09 10/500 2026-04-10 21:21 by Claireyyyy
[考研] 青岛科技大学材料学院,环境学院调剂补录4月10日以前都可以 +3 1青科大。 2026-04-09 5/250 2026-04-10 09:58 by 翩翩一书生
信息提示
请填处理意见