24小时热门版块排行榜    

查看: 6439  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Mingle_Su

银虫 (小有名气)

[求助] CoIP/蛋白互作|| 阴性对照杂出条带 ||FLAG HA Triton 洗涤 原生质体瞬时表达 已有2人参与

阴性对照的也被沉淀下来了,一周的实验就这样废了,请各位资深朋友帮分析下原因。每个样品用了20ul带FLAG抗体的磁珠(sigma),孵育结合后用0.1%的Triton 100 洗涤4次,最后用50mM的Tris-HCl pH=7.5 洗涤,每次洗涤均用1mL的buffer。个人觉得应该不是珠子没洗干净,另外考虑蛋白直接结合磁珠,两个完全不相关的蛋白都可以结合磁珠更加不可能。只能想到以上两个比较直接原因,请各位高手指教。 具体问题见下图,谢谢!

CoIP/蛋白互作|| 阴性对照杂出条带 ||FLAG HA Triton 洗涤 原生质体瞬时表达
CoIP
回复此楼
Succeed
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

十比

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
Mingle_Su: 金币+1, 有帮助 2015-12-15 23:09:28
说明两个蛋白可能本身就没有互作,出现的条带可能是本底,你减少曝光时间HA条带可能就看不到了。
11楼2015-12-14 13:01:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

陈爱中

新虫 (小有名气)

反正你都过表达的,为什么不直接做体外pull-down?
2楼2015-12-13 11:19:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mofashishe

铜虫 (小有名气)

e81那个样品和flag抗体有交叉反应?

发自小木虫Android客户端
3楼2015-12-13 11:37:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mingle_Su

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 陈爱中 at 2015-12-13 11:19:35
反正你都过表达的,为什么不直接做体外pull-down?

原生质体过表达和原核过表达差挺多的。其实我同时在做酵母双杂交,BiFC 和共定位的实验,哈哈。
Succeed
4楼2015-12-13 13:32:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 3/150 2026-09-01 01:52 by o3EMxHUAQDtS
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 3/150 2026-09-01 01:40 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 3/150 2026-08-31 22:23 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
请填处理意见