| 查看: 4478 | 回复: 9 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
将引物加上酶切位点问题 已有2人参与
|
|||
|
最近在构建表达载体，确定酶切成功了但是连接不上，我是将质粒双酶切，再将含酶切位点的引物P出目的片段，将这两个相连。我现在怀疑是不是我引物加酶切位点时弄错了？这个加了酶切位点的引物是能p出目的片段的，是否是酶切位点加错了？ 未加位点的序列：1-F: 5'AGTTCCAGCATACCATACACCC 1-R: 5'TCGCAGCCACAGTTTAGATAG 加了酶切位点：1-F-SpeI： 5’ GGACTAGT AGTTCCAGCATACCATACACCC 2-R-HindIII: 5‘ CCCAAGCTT TCGCAGCCACAGTTTAGATAG 做了好久了，求各位高手指点！ 连接体系 takara T4 ：1 ul 10*buffer：1 ul 目的片段：0.3 pmol 载体片段：0.03 pmol ddH2O: up to 10ul 16℃过夜连接（12-14h） 做了两个月了  |
回复此楼» 猜你喜欢
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有91人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 连接老连不上，求指导
已经有11人回复
- （侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略
已经有89人回复
- 【专题】PCR实验技术指南
已经有535人回复
- 生物学软件介绍及其下载地址【学生物的会很有用】
已经有24人回复
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
- 金币: 4607.4
- 散金: 3521
- 红花: 33
- 帖子: 1804
- 在线: 375.4小时
- 虫号: 1392705
- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-18 23:00:00
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-18 23:00:00
|
目的片段pcr完是带走保护碱基的平末端，不能直接连接，要通过相应的双酶切后出现粘性末端，才可以和载体连接 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-01-16 07:59:09
a86052
金虫 (正式写手)
- 应助: 151 (高中生)
- 金币: 1648.5
- 散金: 110
- 红花: 8
- 帖子: 561
- 在线: 737.5小时
- 虫号: 864561
- 注册: 2009-10-07
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2015-12-11 16:28:38
3楼2016-01-16 00:15:59
5楼2016-01-18 19:46:21
