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杨仔儿

木虫 (著名写手)

[求助] 原核表达的菌液反复冻融,对蛋白活性有影响吗?已有6人参与

原核表达的菌液反复冻融,对蛋白活性有影响吗?
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繁夏

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感谢参与,应助指数 +1
肯定有影响。你可以把样品分成几份保存,避免反复冻融。

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5楼2015-12-11 17:01:26
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北国佳人

铜虫 (小有名气)

要看研究目的,,有的通过反复动融的方法,来为后续蛋白充分有效的提取
努力的小蜜蜂
6楼2015-12-12 10:39:08
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
冻融破碎细胞当然可以,但是过程慢,可能会发生降解,如果细胞量大的话还可以,如果是少部分细胞那就不建议这么操作。
一般来说,原核蛋白表达纯化中细胞破碎的方法就是用超声和酶解破碎,你说超声破碎不理想是什么情况?
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
11楼2015-12-14 10:13:21
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肖大爷1314

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

原核表达蛋白活性本身就无保证,不像真核蛋白表达,能实现蛋白的复杂修饰,和保证活性。免疫动物,是做抗体的吗?一般的原核表达蛋白就算没有活性也可以.
追求真理的道路上永远不会孤独
14楼2015-12-15 11:26:01
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普通回帖

hc2015

新虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
当然有。有个破碎方法就是反复冻融啊,机械过程对细胞有损失,蛋白的环境变化,蛋白的活性自然有变化。祝顺利
2楼2015-12-11 13:36:42
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有影响的,赞同楼上的观点。祝顺利
3楼2015-12-11 13:57:13
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qwwzyhk

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有影响,确定。要看你的目标蛋白种类,活性等,还有反复冻融次数以及时间,我们做的,冻融一次,一周,酶活降低10%左右。
要么忍,要么残忍,要么滚。。。
4楼2015-12-11 16:13:31
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杨仔儿

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 北国佳人 at 2015-12-12 10:39:08
要看研究目的,,有的通过反复动融的方法,来为后续蛋白充分有效的提取

我要纯化蛋白,之后免疫动物,超生不是很理想,想反复冻融试试

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7楼2015-12-12 11:38:07
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杨仔儿

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 繁夏 at 2015-12-11 17:01:26
肯定有影响。你可以把样品分成几份保存,避免反复冻融。

我想纯化蛋白,但是超声破碎不理想,想反复冻融试试

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2015-12-12 11:38:45
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繁夏

版主 (知名作家)

优秀版主优秀版主

额,你是存在这个意思啊!那你用酶处理!

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9楼2015-12-12 11:43:26
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杨仔儿

木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 繁夏 at 2015-12-12 11:43:26
额,你是存在这个意思啊!那你用酶处理!

我在试试吧,谢啦

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10楼2015-12-12 11:57:44
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