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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 原核表达的菌液反复冻融，对蛋白活性有影响吗？
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
冻融破碎细胞当然可以，但是过程慢，可能会发生降解，如果细胞量大的话还可以，如果是少部分细胞那就不建议这么操作。
一般来说，原核蛋白表达纯化中细胞破碎的方法就是用超声和酶解破碎，你说超声破碎不理想是什么情况？
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
11楼2015-12-14 10:13:21
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-12-14 10:13:21
冻融破碎细胞当然可以，但是过程慢，可能会发生降解，如果细胞量大的话还可以，如果是少部分细胞那就不建议这么操作。
一般来说，原核蛋白表达纯化中细胞破碎的方法就是用超声和酶解破碎，你说超声破碎不理想是什么 ...

正常超声破碎后菌液会变澄清，但是我的变化很不明显

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12楼2015-12-14 15:40:13
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土质1992

新虫 (初入文坛)
看蛋白稳定性了，建议你分几份

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13楼2015-12-14 23:25:35
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肖大爷1314

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

原核表达蛋白活性本身就无保证，不像真核蛋白表达，能实现蛋白的复杂修饰，和保证活性。免疫动物，是做抗体的吗？一般的原核表达蛋白就算没有活性也可以.
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追求真理的道路上永远不会孤独
14楼2015-12-15 11:26:01
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 土质1992 at 2015-12-14 23:25:35
看蛋白稳定性了，建议你分几份

分几份后,把反复冻融和没有冻融的跑PAGE对比，看条带大小吗？
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15楼2015-12-15 16:49:48
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 肖大爷1314 at 2015-12-15 11:26:01
原核表达蛋白活性本身就无保证，不像真核蛋白表达，能实现蛋白的复杂修饰，和保证活性。免疫动物，是做抗体的吗？一般的原核表达蛋白就算没有活性也可以....

免疫动物后，采集血清，做ELISA
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16楼2015-12-15 16:50:34
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