24小时热门版块排行榜    

查看: 3642  |  回复: 15

杨仔儿

木虫 (著名写手)

[求助] 原核表达的菌液反复冻融,对蛋白活性有影响吗? 已有6人参与

原核表达的菌液反复冻融,对蛋白活性有影响吗?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

繁夏

版主 (知名作家)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
肯定有影响。你可以把样品分成几份保存,避免反复冻融。

发自小木虫Android客户端
5楼2015-12-11 17:01:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

北国佳人

铜虫 (小有名气)

要看研究目的,,有的通过反复动融的方法,来为后续蛋白充分有效的提取
努力的小蜜蜂
6楼2015-12-12 10:39:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
冻融破碎细胞当然可以,但是过程慢,可能会发生降解,如果细胞量大的话还可以,如果是少部分细胞那就不建议这么操作。
一般来说,原核蛋白表达纯化中细胞破碎的方法就是用超声和酶解破碎,你说超声破碎不理想是什么情况?
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
11楼2015-12-14 10:13:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肖大爷1314

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

原核表达蛋白活性本身就无保证,不像真核蛋白表达,能实现蛋白的复杂修饰,和保证活性。免疫动物,是做抗体的吗?一般的原核表达蛋白就算没有活性也可以.
追求真理的道路上永远不会孤独
14楼2015-12-15 11:26:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

hc2015

新虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
当然有。有个破碎方法就是反复冻融啊,机械过程对细胞有损失,蛋白的环境变化,蛋白的活性自然有变化。祝顺利
2楼2015-12-11 13:36:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有影响的,赞同楼上的观点。祝顺利
3楼2015-12-11 13:57:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qwwzyhk

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有影响,确定。要看你的目标蛋白种类,活性等,还有反复冻融次数以及时间,我们做的,冻融一次,一周,酶活降低10%左右。
要么忍,要么残忍,要么滚。。。
4楼2015-12-11 16:13:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨仔儿

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 北国佳人 at 2015-12-12 10:39:08
要看研究目的,,有的通过反复动融的方法,来为后续蛋白充分有效的提取

我要纯化蛋白,之后免疫动物,超生不是很理想,想反复冻融试试

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2015-12-12 11:38:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨仔儿

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 繁夏 at 2015-12-11 17:01:26
肯定有影响。你可以把样品分成几份保存,避免反复冻融。

我想纯化蛋白,但是超声破碎不理想,想反复冻融试试

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2015-12-12 11:38:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

繁夏

版主 (知名作家)

优秀版主优秀版主

额,你是存在这个意思啊!那你用酶处理!

发自小木虫Android客户端
9楼2015-12-12 11:43:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨仔儿

木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 繁夏 at 2015-12-12 11:43:26
额,你是存在这个意思啊!那你用酶处理!

我在试试吧,谢啦

[ 发自小木虫客户端 ]
10楼2015-12-12 11:57:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 杨仔儿 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +9 majunge000 2026-08-11 11/550 2026-08-15 23:20 by botar
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见