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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 急急急，在线等，关于蛋白体外活性检测的问题
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

[求助] 急急急，在线等，关于蛋白体外活性检测的问题

蛋白体外活性检测的方法有哪些，具体操作是什么，原理是什么，谢谢，如有帮助发金币
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1楼 2015-12-07 17:25:25
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
18761615793: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 很有帮助 2015-12-08 10:06:26
体外的蛋白活力检测主要分为结合和功能两方面。

结合：就是蛋白和目的靶点之间的结合能力的强弱，这个其实是测量可逆反应过程中的蛋白和目的靶点的解离平衡常数。一般会用同位素检测或者ELISA进行，你可以搜索Ligand-Binding Assay，能够找到不少资料。

功能是建立在结合的基础之上的，功能学实验主要集中在细胞水平，蛋白和目的靶点结合后，引起了细胞体内的信号应答，使细胞的某些功能得到增强或者抑制等.比如ADCC,抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity ）是指表达IgGFc受体的NK细胞、巨噬细胞和中性粒细胞等，通过与已结合在病毒感染细胞和肿瘤细胞等靶细胞表面的IgG抗体的Fc段结合，而杀伤这些靶细胞的作用。IgG抗体可介导这些细胞发挥ADCC作用，其中NK细胞是能发挥ADCC作用的主要细胞。在抗体介导的ADCC作用的发生过程中，抗体只能与靶细胞上的相应抗原表位特异性结合，而NK细胞等效应细胞可杀伤任何已与抗体结合的靶细胞，故抗体与靶细胞上的抗原结合是特异性的，NK细胞等对靶细胞的杀伤作用是非特异性的。
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18761615793
2楼2015-12-07 19:09:39
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
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2楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-07 19:09:39
体外的蛋白活力检测主要分为结合和功能两方面。

结合：就是蛋白和目的靶点之间的结合能力的强弱，这个其实是测量可逆反应过程中的蛋白和目的靶点的解离平衡常数。一般会用同位素检测或者ELISA进行，你可以搜索Li ...

结合的部分说的很明白，关于功能的解说也算是明白，比如后面的举例不太能看懂啊，大神还有其他一些想说的吗，关于蛋白活性检测方面的都可以，或者一些资料也可以
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3楼2015-12-08 10:08:38
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
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2楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-07 19:09:39
体外的蛋白活力检测主要分为结合和功能两方面。

结合：就是蛋白和目的靶点之间的结合能力的强弱，这个其实是测量可逆反应过程中的蛋白和目的靶点的解离平衡常数。一般会用同位素检测或者ELISA进行，你可以搜索Li ...

蛋白和目的靶点结合活性的强弱，通过同位素标记可以得到蛋白活性强弱，我想知道是什么原理啊？或者怎么做?
然后关于蛋白功能活性的强弱，是蛋白和靶点结合后，引起了细胞体内的信号应答，这样的一个过程，可以通过什么实验验证呢，网上关于蛋白活性的检测，有MTT和结晶紫染色法，这两种方法是检测活细胞的数量的吧？对蛋白的活性又怎么能检测出来呢？期待您的回答~
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4楼2015-12-09 14:17:46
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
引用回帖:
2楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-07 19:09:39
体外的蛋白活力检测主要分为结合和功能两方面。

结合：就是蛋白和目的靶点之间的结合能力的强弱，这个其实是测量可逆反应过程中的蛋白和目的靶点的解离平衡常数。一般会用同位素检测或者ELISA进行，你可以搜索Li ...

还有，我想知道的是蛋白体外活性检测和你说的蛋白体外活力检测是一个概念吗，刚接触这方面，不懂啊，多多帮助，谢谢~
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5楼2015-12-09 14:19:29
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)
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5楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-12-09 14:19:29
还有，我想知道的是蛋白体外活性检测和你说的蛋白体外活力检测是一个概念吗，刚接触这方面，不懂啊，多多帮助，谢谢~...

活力活性应该是一个概念，主要说的是蛋白能否发挥功能作用
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6楼2015-12-09 20:23:30
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
18761615793: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 非常感谢 2015-12-09 22:03:14
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4楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-12-09 14:17:46
蛋白和目的靶点结合活性的强弱，通过同位素标记可以得到蛋白活性强弱，我想知道是什么原理啊？或者怎么做?
然后关于蛋白功能活性的强弱，是蛋白和靶点结合后，引起了细胞体内的信号应答，这样的一个过程，可以通过 ...

结合你得明白KD的概念，可以搜索一下ligand-binding assay，，能够得到不少资料，先看些基础的资料。蛋白引起的功能可能有多种，最简单的是蛋白和细胞作用后，把细胞杀死了，根据加入蛋白的越多细胞死亡的越多，通过检测活细胞的数目来检测蛋白的效果。MTT或者结晶紫都是测量活细胞多少的手段。
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7楼2015-12-09 20:29:12
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木虫 (正式写手)

小虫
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7楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-09 20:29:12
结合你得明白KD的概念，可以搜索一下ligand-binding assay，，能够得到不少资料，先看些基础的资料。蛋白引起的功能可能有多种，最简单的是蛋白和细胞作用后，把细胞杀死了，根据加入蛋白的越多细胞死亡的越多，通 ...

非常感谢，很有帮助，还有一个问题是，在96孔板中，对每个孔中的细胞加入不同浓度的蛋白，然后MTT检测活细胞的数量，可以反映出蛋白对细胞毒性作用，那这就代表着蛋白活性不好或者是没有活性吗？相反，如果细胞都没有被杀死，是不是说明蛋白活性好呢？？
所以很多资料标题都是这样说的：“ MTT法测蛋白活性”，其实这是不准的是吧
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8楼2015-12-09 22:08:57
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)
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8楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-12-09 22:08:57
非常感谢，很有帮助，还有一个问题是，在96孔板中，对每个孔中的细胞加入不同浓度的蛋白，然后MTT检测活细胞的数量，可以反映出蛋白对细胞毒性作用，那这就代表着蛋白活性不好或者是没有活性吗？相反，如果细胞都没 ...

这看什么细胞了，肿瘤细胞挂了那就是蛋白活性好，正常细胞挂了那就是蛋白有毒性。MTT测的是细胞活力，你搜索一下MTT的作用原理就明白了

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18761615793
9楼2015-12-09 22:16:52
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木虫 (正式写手)

小虫
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9楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-09 22:16:52
这看什么细胞了，肿瘤细胞挂了那就是蛋白活性好，正常细胞挂了那就是蛋白有毒性。MTT测的是细胞活力，你搜索一下MTT的作用原理就明白了
...

嗯，非常感谢，我考虑的不周全，把所有的细胞都想成是好细胞，没考虑肿瘤这些细胞，非常感谢！

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10楼2015-12-10 08:52:34
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