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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

[求助] 急急急,在线等,关于蛋白体外活性检测的问题

蛋白体外活性检测的方法有哪些,具体操作是什么,原理是什么,谢谢,如有帮助发金币
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

引用回帖:
7楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-09 20:29:12
结合你得明白KD的概念,可以搜索一下ligand-binding assay,,能够得到不少资料,先看些基础的资料。蛋白引起的功能可能有多种,最简单的是蛋白和细胞作用后,把细胞杀死了,根据加入蛋白的越多细胞死亡的越多,通 ...

非常感谢,很有帮助,还有一个问题是,在96孔板中,对每个孔中的细胞加入不同浓度的蛋白,然后MTT检测活细胞的数量,可以反映出蛋白对细胞毒性作用,那这就代表着蛋白活性不好或者是没有活性吗?相反,如果细胞都没有被杀死,是不是说明蛋白活性好呢??
所以很多资料标题都是这样说的:“ MTT法测蛋白活性”,其实这是不准的是吧
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8楼2015-12-09 22:08:57
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
18761615793: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 很有帮助 2015-12-08 10:06:26
体外的蛋白活力检测主要分为结合和功能两方面。

结合:就是蛋白和目的靶点之间的结合能力的强弱,这个其实是测量可逆反应过程中的蛋白和目的靶点的解离平衡常数。一般会用同位素检测或者ELISA进行,你可以搜索Ligand-Binding Assay,能够找到不少资料。

功能是建立在结合的基础之上的,功能学实验主要集中在细胞水平,蛋白和目的靶点结合后,引起了细胞体内的信号应答,使细胞的某些功能得到增强或者抑制等.比如ADCC,抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity )是指表达IgGFc受体的NK细胞、巨噬细胞和中性粒细胞等,通过与已结合在病毒感染细胞和肿瘤细胞等靶细胞表面的IgG抗体的Fc段结合,而杀伤这些靶细胞的作用。IgG抗体可介导这些细胞发挥ADCC作用,其中NK细胞是能发挥ADCC作用的主要细胞。在抗体介导的ADCC作用的发生过程中,抗体只能与靶细胞上的相应抗原表位特异性结合,而NK细胞等效应细胞可杀伤任何已与抗体结合的靶细胞,故抗体与靶细胞上的抗原结合是特异性的,NK细胞等对靶细胞的杀伤作用是非特异性的。

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2楼2015-12-07 19:09:39
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

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引用回帖:
2楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-07 19:09:39
体外的蛋白活力检测主要分为结合和功能两方面。

结合:就是蛋白和目的靶点之间的结合能力的强弱,这个其实是测量可逆反应过程中的蛋白和目的靶点的解离平衡常数。一般会用同位素检测或者ELISA进行,你可以搜索Li ...

结合的部分说的很明白,关于功能的解说也算是明白,比如后面的举例不太能看懂啊,大神还有其他一些想说的吗,关于蛋白活性检测方面的都可以,或者一些资料也可以
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3楼2015-12-08 10:08:38
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

引用回帖:
2楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-07 19:09:39
体外的蛋白活力检测主要分为结合和功能两方面。

结合:就是蛋白和目的靶点之间的结合能力的强弱,这个其实是测量可逆反应过程中的蛋白和目的靶点的解离平衡常数。一般会用同位素检测或者ELISA进行,你可以搜索Li ...

蛋白和目的靶点结合活性的强弱,通过同位素标记可以得到蛋白活性强弱,我想知道是什么原理啊?或者怎么做?
然后关于蛋白功能活性的强弱,是蛋白和靶点结合后,引起了细胞体内的信号应答,这样的一个过程,可以通过什么实验验证呢,网上关于蛋白活性的检测,有MTT和结晶紫染色法,这两种方法是检测活细胞的数量的吧?对蛋白的活性又怎么能检测出来呢?期待您的回答~
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4楼2015-12-09 14:17:46
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