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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 急急急，在线等，关于蛋白体外活性检测的问题
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

[求助] 急急急，在线等，关于蛋白体外活性检测的问题

蛋白体外活性检测的方法有哪些，具体操作是什么，原理是什么，谢谢，如有帮助发金币
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
1楼 2015-12-07 17:25:25
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-09 22:16:52
这看什么细胞了，肿瘤细胞挂了那就是蛋白活性好，正常细胞挂了那就是蛋白有毒性。MTT测的是细胞活力，你搜索一下MTT的作用原理就明白了
...

嗯，非常感谢，我考虑的不周全，把所有的细胞都想成是好细胞，没考虑肿瘤这些细胞，非常感谢！

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10楼2015-12-10 08:52:34
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
18761615793: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 很有帮助 2015-12-08 10:06:26
体外的蛋白活力检测主要分为结合和功能两方面。

结合：就是蛋白和目的靶点之间的结合能力的强弱，这个其实是测量可逆反应过程中的蛋白和目的靶点的解离平衡常数。一般会用同位素检测或者ELISA进行，你可以搜索Ligand-Binding Assay，能够找到不少资料。

功能是建立在结合的基础之上的，功能学实验主要集中在细胞水平，蛋白和目的靶点结合后，引起了细胞体内的信号应答，使细胞的某些功能得到增强或者抑制等.比如ADCC,抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity ）是指表达IgGFc受体的NK细胞、巨噬细胞和中性粒细胞等，通过与已结合在病毒感染细胞和肿瘤细胞等靶细胞表面的IgG抗体的Fc段结合，而杀伤这些靶细胞的作用。IgG抗体可介导这些细胞发挥ADCC作用，其中NK细胞是能发挥ADCC作用的主要细胞。在抗体介导的ADCC作用的发生过程中，抗体只能与靶细胞上的相应抗原表位特异性结合，而NK细胞等效应细胞可杀伤任何已与抗体结合的靶细胞，故抗体与靶细胞上的抗原结合是特异性的，NK细胞等对靶细胞的杀伤作用是非特异性的。
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18761615793
2楼2015-12-07 19:09:39
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-07 19:09:39
体外的蛋白活力检测主要分为结合和功能两方面。

结合：就是蛋白和目的靶点之间的结合能力的强弱，这个其实是测量可逆反应过程中的蛋白和目的靶点的解离平衡常数。一般会用同位素检测或者ELISA进行，你可以搜索Li ...

结合的部分说的很明白，关于功能的解说也算是明白，比如后面的举例不太能看懂啊，大神还有其他一些想说的吗，关于蛋白活性检测方面的都可以，或者一些资料也可以
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3楼2015-12-08 10:08:38
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
引用回帖:
2楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-07 19:09:39
体外的蛋白活力检测主要分为结合和功能两方面。

结合：就是蛋白和目的靶点之间的结合能力的强弱，这个其实是测量可逆反应过程中的蛋白和目的靶点的解离平衡常数。一般会用同位素检测或者ELISA进行，你可以搜索Li ...

蛋白和目的靶点结合活性的强弱，通过同位素标记可以得到蛋白活性强弱，我想知道是什么原理啊？或者怎么做?
然后关于蛋白功能活性的强弱，是蛋白和靶点结合后，引起了细胞体内的信号应答，这样的一个过程，可以通过什么实验验证呢，网上关于蛋白活性的检测，有MTT和结晶紫染色法，这两种方法是检测活细胞的数量的吧？对蛋白的活性又怎么能检测出来呢？期待您的回答~
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-12-09 14:17:46
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