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大咖小蛊

银虫 (小有名气)

[求助] 枯草芽孢杆菌在1吨发酵罐中生产的正常指标如何 已有4人参与

最近做的发酵罐菌制剂出现问题:发酵罐菌液活菌数检测结果比摇瓶种子液差不多;有时更低。其次,摇瓶种子液发酵过程中产酸:PH也是有7到6.5的,但是接种至发酵罐中培养,培养过程中PH是7升到8.5了。摇瓶菌液和发酵罐菌液镜检菌种形态基本差不多,革兰氏染色阳性。形态为短杆状或孢子状。200的摇瓶培养24小时,再接1吨发酵罐培养32小时。温度在35-40,培养基为一般的碳源和氮源的粗料培养,关键是以前能做到摇瓶菌数的10倍多吧,噬菌体也怀疑过,平板检测过但是不知道如何判断。后来消过毒,但是之后菌数还是做不起来,也做了复壮筛选但是酪蛋白圈看不出来。摇瓶培养的菌数有5亿左右吧。希望懂的做过的同行能帮我分析,指点迷津,新币不多,不要见怪!
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大咖小蛊

银虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 陈_劼_翔 at 2015-12-10 12:43:55
ph变化和很多因素相关的,菌种特性是一方面,培养基和培养条件也是关键。你可以自己去查资料。例如好氧发酵如果缺氧的话可能会累积有机酸。或是前期菌体生长过快,即便氧气充足,有氧呼吸也是跟不上的(受柠檬酸循 ...

嗯,也是有可能的,摇瓶可能存在氧气不足的情况。发酵罐氧气比较足,后期可能营养物质跟不上。但是,以前做的菌数和现在做的相差有10倍左右啊,其他的培养条件和配方都不变的,所以我们怀疑要么染噬菌体要么菌种退化了。。
12楼2015-12-11 09:17:53
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bigboy2050

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
大咖小蛊: 金币+2, 有帮助 2015-12-22 11:46:42
可能是温和噬菌体,平时环境中活菌排放多吗?
职业无分贵贱,做事要有格调
2楼2015-12-07 21:22:55
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红色绯鱼

新虫 (初入文坛)

请教一下你,枯草杆菌摇床活化时的转速和时间多少的?是过夜12h培养吗?

发自小木虫Android客户端
3楼2015-12-07 23:27:33
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大咖小蛊

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bigboy2050 at 2015-12-07 21:22:55
可能是温和噬菌体,平时环境中活菌排放多吗?

每天早上排出菌液,排料口再进行蒸汽消毒10分钟左右。
4楼2015-12-08 08:43:46
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大咖小蛊

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 红色绯鱼 at 2015-12-07 23:27:33
请教一下你,枯草杆菌摇床活化时的转速和时间多少的?是过夜12h培养吗?

转速200r/min,24h吧
5楼2015-12-08 10:44:53
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大咖小蛊

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 红色绯鱼 at 2015-12-07 23:27:33
请教一下你,枯草杆菌摇床活化时的转速和时间多少的?是过夜12h培养吗?

摇瓶为一级培养
6楼2015-12-08 10:45:41
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陈_劼_翔

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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大咖小蛊: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-12-22 11:47:12
摇瓶通气效果不好产酸不奇怪啊。根据你的描述,你摇瓶时间太长了,菌都衰老了。但这应该不是发酵效果变差的关键。如果你们确认任何外在条件都没变的话,发酵效果突然变差就应该是菌种的原因。找到以前保藏的菌种重新活化吧。
这是签名~
7楼2015-12-08 12:49:25
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xiaojiancai

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
大咖小蛊: 金币+3, 有帮助 2015-12-22 11:47:24
发酵温度可能有点高。另外接种摇瓶是否培养时间过长了?这些都再确认一下为好。
知福福常在,随缘缘自来!
8楼2015-12-08 18:18:28
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大咖小蛊

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 陈_劼_翔 at 2015-12-08 12:49:25
摇瓶通气效果不好产酸不奇怪啊。根据你的描述,你摇瓶时间太长了,菌都衰老了。但这应该不是发酵效果变差的关键。如果你们确认任何外在条件都没变的话,发酵效果突然变差就应该是菌种的原因。找到以前保藏的菌种重新 ...

那枯草芽孢杆菌正常培养是产酸吗?我问过老师说是产酸啊。但是也有人上发酵罐做PH会升高,我就是想知道PH的正常变化时怎么样的。摇瓶培养时间确实长了些,会缩短摇瓶培养时间再上罐试试的。菌种也会同步的活化复壮处理。感谢应助!
9楼2015-12-09 15:03:35
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大咖小蛊

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by xiaojiancai at 2015-12-08 18:18:28
发酵温度可能有点高。另外接种摇瓶是否培养时间过长了?这些都再确认一下为好。

枯草芽孢杆菌培养温度应该比较广吧。我们33-40℃都做过,这个对活菌数影响应该不是很大吧。摇瓶培养时间会做调整再试试的。谢谢应助!
10楼2015-12-09 15:05:48
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