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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 枯草芽孢杆菌在1吨发酵罐中生产的正常指标如何
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大咖小蛊

银虫 (小有名气)

[求助] 枯草芽孢杆菌在1吨发酵罐中生产的正常指标如何 已有4人参与

最近做的发酵罐菌制剂出现问题：发酵罐菌液活菌数检测结果比摇瓶种子液差不多；有时更低。其次，摇瓶种子液发酵过程中产酸：PH也是有7到6.5的，但是接种至发酵罐中培养，培养过程中PH是7升到8.5了。摇瓶菌液和发酵罐菌液镜检菌种形态基本差不多，革兰氏染色阳性。形态为短杆状或孢子状。200的摇瓶培养24小时，再接1吨发酵罐培养32小时。温度在35-40，培养基为一般的碳源和氮源的粗料培养，关键是以前能做到摇瓶菌数的10倍多吧，噬菌体也怀疑过，平板检测过但是不知道如何判断。后来消过毒，但是之后菌数还是做不起来，也做了复壮筛选但是酪蛋白圈看不出来。摇瓶培养的菌数有5亿左右吧。希望懂的做过的同行能帮我分析，指点迷津，新币不多，不要见怪！
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1楼 2015-12-07 11:36:22
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大咖小蛊

银虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by bigboy2050 at 2015-12-07 21:22:55
可能是温和噬菌体，平时环境中活菌排放多吗？

每天早上排出菌液，排料口再进行蒸汽消毒10分钟左右。
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4楼2015-12-08 08:43:46
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大咖小蛊

银虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by 红色绯鱼 at 2015-12-07 23:27:33
请教一下你，枯草杆菌摇床活化时的转速和时间多少的？是过夜12h培养吗？

转速200r/min,24h吧
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5楼2015-12-08 10:44:53
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大咖小蛊

银虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by 红色绯鱼 at 2015-12-07 23:27:33
请教一下你，枯草杆菌摇床活化时的转速和时间多少的？是过夜12h培养吗？

摇瓶为一级培养
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6楼2015-12-08 10:45:41
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大咖小蛊

银虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 陈_劼_翔 at 2015-12-08 12:49:25
摇瓶通气效果不好产酸不奇怪啊。根据你的描述，你摇瓶时间太长了，菌都衰老了。但这应该不是发酵效果变差的关键。如果你们确认任何外在条件都没变的话，发酵效果突然变差就应该是菌种的原因。找到以前保藏的菌种重新 ...

那枯草芽孢杆菌正常培养是产酸吗？我问过老师说是产酸啊。但是也有人上发酵罐做PH会升高，我就是想知道PH的正常变化时怎么样的。摇瓶培养时间确实长了些，会缩短摇瓶培养时间再上罐试试的。菌种也会同步的活化复壮处理。感谢应助！
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9楼2015-12-09 15:03:35
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大咖小蛊

银虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by xiaojiancai at 2015-12-08 18:18:28
发酵温度可能有点高。另外接种摇瓶是否培养时间过长了？这些都再确认一下为好。

枯草芽孢杆菌培养温度应该比较广吧。我们33-40℃都做过，这个对活菌数影响应该不是很大吧。摇瓶培养时间会做调整再试试的。谢谢应助！
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10楼2015-12-09 15:05:48
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大咖小蛊

银虫 (小有名气)
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11楼: Originally posted by 陈_劼_翔 at 2015-12-10 12:43:55
ph变化和很多因素相关的，菌种特性是一方面，培养基和培养条件也是关键。你可以自己去查资料。例如好氧发酵如果缺氧的话可能会累积有机酸。或是前期菌体生长过快，即便氧气充足，有氧呼吸也是跟不上的（受柠檬酸循 ...

嗯，也是有可能的，摇瓶可能存在氧气不足的情况。发酵罐氧气比较足，后期可能营养物质跟不上。但是，以前做的菌数和现在做的相差有10倍左右啊，其他的培养条件和配方都不变的，所以我们怀疑要么染噬菌体要么菌种退化了。。
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12楼2015-12-11 09:17:53
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大咖小蛊

银虫 (小有名气)
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13楼: Originally posted by 陈_劼_翔 at 2015-12-11 18:51:37
培养基组分和水质以及灭菌的蒸汽都确认无变化吗？那菌种出问题的可能性大些，枯草染噬菌体少见。你们有观测整个发酵过程吗？有没更具体的数据差异？就只有一个发酵结束的菌浓数据吗？...

我们现在也是怀疑菌种的问题，后续会做相关的复壮实验看看。整个发酵过程我们现在中途取样检测，目前只检测发酵结束菌数。我也感觉不会染噬菌体的，这段时间一直在做，菌数还是不高，但是PH又回落到中性，试纸显色为6.5-7.0
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16楼2015-12-21 14:20:22
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大咖小蛊

银虫 (小有名气)
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14楼: Originally posted by 看庭前花开花落 at 2015-12-12 09:50:17
PH变化与配方有关，我这是先降后升，然后就转化成孢子了。
摇瓶培养时间为14hr左右。

这个我们考虑到了，实验室做的配方是按照发酵罐配方比例来的。结果实验室摇瓶做的PH试纸6.5左右，发酵罐PH试纸8.5左右。但是现在发酵罐的PH又变为6.5-7左右了。
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17楼2015-12-21 14:22:55
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