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表达蛋白质粒的选择 已有4人参与
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| 请帮忙系统的介绍一下质粒，关键是表达蛋白时，选择质粒需要考虑哪些因素？我想表达一个蛋白，后续可能会对其单独的结构域也进行研究，那我现在在选择质粒表达整个蛋白的时候有需要为后续研究考虑什么吗？谢谢大家啦！ |
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siriusxuan
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2楼2015-12-02 18:17:18
3楼2015-12-02 19:42:40
kwkw
木虫 (著名写手)
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4楼2015-12-02 19:52:22
5楼2015-12-03 15:18:56
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
应该先确定你的表达蛋白的目的，然后再来选择优势的表达质粒。一般分为原核表达和真核表达质粒，前者主要用于体外纯化蛋白，如带His-tag的PET系列，带GST-Tag的PGEX系列，选用不同的表达载体，就得建立相应的纯化系统，包括缓冲液的配置、珠子/柱子的选择等等，还得考虑目的蛋白的可溶性，一般大tag的融合蛋白可溶性要好一些，如GST的。这种原核纯化的蛋白一般用来制备单一的、需要量大的蛋白。真核表达载体一般是细胞、体内表达等需要时所用，较多的是PCND，也有好多公司自己开发的都可以。这个比较简单，不用建立相应的表达体系，只需要将它放到细胞或体内细胞即可，唯一考虑的是它的启动子的选择，常用质粒都是cmv的，表达效率较高。也有多种启动子经过改造的表达载体，一般用来表达需要调控表达时间及表达量的蛋白。根据你的要求，我想你以后这两种表达载体都会用到的。 |
6楼2015-12-03 16:21:44