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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR 本底过高
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xincer

木虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR 本底过高 已有2人参与

麻烦帮我看一下 ，我是自己设计的双链探针分别标记的猝灭（BHQ1）和荧光基团（FAM），退火时检测，有靶序列时双链解链然后发光，为什么本底信号这么高，我试过降低退火温度，结果本底还是有60000左右，用的是sepone plus 的仪器，会不会是操作过程中荧光的污染啊，可是我每次跑都会有这么多本底。大家给看看，  还有如果本底信号过高是不是会影响系统的敏感性啊。急求帮助，谢谢了。

荧光定量PCR 本底过高
Multicomponent Plot.jpg
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1楼 2015-12-01 10:01:43
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xincer

木虫 (小有名气)
怎么木有人，。求帮助。啊。。。
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2楼2015-12-02 09:46:05
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特务兔

新虫 (初入文坛)
因为觉得看不懂，不专业，所以不敢妄下评论

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3楼2015-12-02 10:48:37
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
荧光信号的绝对增长量不够，所以显得本底过高，原因较多！
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4楼2015-12-02 10:50:45
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xincer

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by love_st at 2015-12-02 10:50:45
荧光信号的绝对增长量不够，所以显得本底过高，原因较多！

增加原料或探针浓度可行吗？

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5楼2015-12-02 11:21:03
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love_st

金虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xincer at 2015-12-02 11:21:03
增加原料或探针浓度可行吗？
...

现在用的探针浓度多少
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6楼2015-12-02 12:00:33
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xincer

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by love_st at 2015-12-02 12:00:33
现在用的探针浓度多少...

400nm  但每个循环之后探针不参与下一个循环。就和taqman类似每个循环之后荧光被积累。

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7楼2015-12-02 15:51:47
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love_st

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xincer at 2015-12-02 15:51:47
400nm  但每个循环之后探针不参与下一个循环。就和taqman类似每个循环之后荧光被积累。
...

浓度挺高了，探针基本也就这样了
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8楼2015-12-02 16:03:56
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xincer

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by love_st at 2015-12-02 16:03:56
浓度挺高了，探针基本也就这样了...

怀疑是不是探针本身的问题，有多余的荧光，或者猝灭效果不好。

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9楼2015-12-02 16:11:04
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love_st

金虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by xincer at 2015-12-02 16:11:04
怀疑是不是探针本身的问题，有多余的荧光，或者猝灭效果不好。
...

有些区域或者有些探针本身信号就很低，如果排除你体系的问题，为了提高探针信号，你可考虑重新设计探针
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10楼2015-12-02 16:12:34
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