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dirkyoung

金虫 (正式写手)

[求助] 免疫组化显色问题,新手求助 已有3人参与

新手做免疫组化,用的是鼠源的一抗PCNA,羊抗鼠的二抗,HRP标记。DAB试剂盒显色,抗体都用PBS按照最大浓度稀释。结果不要说真假阳性,连背景几乎都没有(封闭步骤我都已经省略了),说明书的显微镜下控制反应时间,我是什么都看不到的。用二抗液直接和显色液反应只有非常非常弱的棕色。刚好实验室有个elisa的TMB试剂盒,和二抗反应几乎瞬间变色,二抗稀释液和dab工作液反应难道不该很快变色吗?dab试剂盒用了两家的都是这个样子(博士德和中杉金桥,都算是国内不错的牌子吧)。周围没有做免疫组化的人,实在太无力了到底问题出在哪儿呢?我看很多做组化的都是纠结背景太强的问题。
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hoyeung

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得可能是抗原修复没做好,或者显色剂太稀,反应时间不够

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2楼2015-12-20 23:14:24
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彼岸花开开花

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

看你是做细胞免疫还是组织免疫??细胞类的话可能是一开始固定就没有做好,组织类的话可能是抗原修复出现问题
3楼2015-12-23 11:02:12
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

一抗稀释浓度一般在1:400左右非特异性较低,当然试剂盒不同稀释浓度也不同这个需要自己多试几次。抗原修复时间和温度要足够,组织取材要快,准。

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知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
4楼2015-12-24 10:51:39
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