| 查看: 4581 | 回复: 9 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
用植物cDNA扩增一个1700bp左右的全长序列，一直扩不出来，求助原因 已有4人参与
|
|||
| 补充：1、引物是根据已有的cDNA序列设计的；2、同样的引物用基因组DNA做模板就能扩增出来；3、cDNA是反转录之后马上就做PCR的，同时还用荧光定量的引物扩增了一段200bp的小片段，200bp的片段能扩增出来，但是全长一直扩不出来。求助有经验的同学给分析一下 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有248人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有6人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yangqian_517: 金币+5, ★有帮助 2015-11-25 18:23:15
感谢参与，应助指数 +1
yangqian_517: 金币+5, ★有帮助 2015-11-25 18:23:15
|
基因组DNA和cDNA不一样，你把退火温度降一下，你用的是扩增长片段的酶吗？ 发自小木虫Android客户端 |
4楼2015-11-25 13:16:12
2楼2015-11-24 20:09:31
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yangqian_517: 金币+5, ★有帮助 2015-11-25 18:22:58
感谢参与，应助指数 +1
yangqian_517: 金币+5, ★有帮助 2015-11-25 18:22:58
|
我之前一直也是扩不出来，这两天刚刚有点成绩。我问过生物公司的技术人员，也在论坛求助过，他们说可能是因为逆转录不完全，有一部分的链没有打开，你可以换个好一点的逆转录试剂盒，或者你可以试试用分段克隆的方法分别设计引物，克隆出几段，然后连接起来。有说用重叠延伸pcr方法连接几个片段的，但我用的是论坛求助时他们告诉我的方法，就是在你的目的序列里找到几个酶切位点，在酶切位点处设计引物，分别扩增出几个片段，酶切并胶回收后进行粘性末端连接，连完再以这个为模板，用全序列的引物进行pcr。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2015-11-24 21:28:39
5楼2015-11-25 18:21:04
