应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 毕赤酵母表达
131/2返回列表12下一页
查看: 1751  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

632362481

铜虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母表达 已有1人参与

想请教一下，最近在做毕赤酵母GS115表达，转化完，涂的YPDS平板，提取酵母基因组进行PCR验证，挑了10个菌落，发现都是空载体，没有转进去。怎么办？
回复此楼

» 猜你喜欢
。。。
1楼 2015-11-20 16:03:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

czfscf

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能是质粒出错 密码子木有做好  也有可能没有转进去 那就重新转。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

632362481
Ecological Genomics；the scientific walking hormone
3楼2015-11-20 18:37:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)
毕赤酵母表达也属于真核细胞表达吧，没转进去，重新转啊，肯定是实验操作问题，，在试一遍
赞一下 回复此楼
2楼2015-11-20 17:02:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

632362481

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by MarchZR at 2015-11-20 17:02:28
毕赤酵母表达也属于真核细胞表达吧，没转进去，重新转啊，肯定是实验操作问题，，在试一遍

都是电转，应该不会出啥错误吧？是不是我挑的比较少啊？还是转化效率比较低呢
赞一下 回复此楼
。。。
4楼2015-11-20 19:40:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

632362481

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by czfscf at 2015-11-20 18:37:09
有可能是质粒出错 密码子木有做好  也有可能没有转进去 那就重新转。

质粒都是测序过的，应该没啥问题吧，是不是转化效率低啊？我挑了十个了，是不是挑的少啊，我提基因组用OMEGAyeast kit提的，通用引物P的，你有没有做过？我这个是伯莱霉素筛选的，ppiczaB载体。
赞一下 回复此楼
。。。
5楼2015-11-20 19:44:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 632362481 at 2015-11-20 19:40:43
都是电转，应该不会出啥错误吧？是不是我挑的比较少啊？还是转化效率比较低呢...

是细胞瞬时转染表达吧？可以用脂质体转染试试，通常转细胞的话，应该是比较容易转进去的吧，转化效率低也不会一个都没转进去吧，要不你先试试其他方法转染看看
赞一下 回复此楼
6楼2015-11-23 16:48:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

632362481

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by MarchZR at 2015-11-23 16:48:01
是细胞瞬时转染表达吧？可以用脂质体转染试试，通常转细胞的话，应该是比较容易转进去的吧，转化效率低也不会一个都没转进去吧，要不你先试试其他方法转染看看...

好
7楼2015-11-23 17:06:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czfscf

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 632362481 at 2015-11-20 19:44:49
质粒都是测序过的，应该没啥问题吧，是不是转化效率低啊？我挑了十个了，是不是挑的少啊，我提基因组用OMEGAyeast kit提的，通用引物P的，你有没有做过？我这个是伯莱霉素筛选的，ppiczaB载体。...

我的事ppiczaA 一般都是一挑一个准的 你确定你的目的片段在质粒里面 ？如果你挑克隆时候都能在zeocin上长，说明质粒已经进去了啊，转化没有问题，那就是质粒不带目的片段了啊。这样的话你是不是用单酶切插入的你的目的片段，是的话，单酶切的自连很严重，我有时要12个里才能挑到一个positive
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

632362481
Ecological Genomics；the scientific walking hormone
8楼2015-11-25 18:15:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

632362481

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by czfscf at 2015-11-25 18:15:58
我的事ppiczaA 一般都是一挑一个准的 你确定你的目的片段在质粒里面 ？如果你挑克隆时候都能在zeocin上长，说明质粒已经进去了啊，转化没有问题，那就是质粒不带目的片段了啊。这样的话你是不是用单酶切插入的你的 ...

你说的对啊，然后昨天我又把电转完的产物重新涂了一下平板，又多加了zeocin，只涂了50ul左右，长成一大片，都不太好挑。哎   问题好多
赞一下 回复此楼
。。。
9楼2015-11-26 09:26:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

632362481

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 632362481 at 2015-11-26 09:26:35
你说的对啊，然后昨天我又把电转完的产物重新涂了一下平板，又多加了zeocin，只涂了50ul左右，长成一大片，都不太好挑。哎   问题好多...

我的是双酶切，测序验证过的。
赞一下 回复此楼
。。。
10楼2015-11-26 09:32:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 632362481 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:41 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:17 by 4wMiSEwB6436
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 7lpolszZVXgi 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:08 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭