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632362481

铜虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母表达 已有1人参与

想请教一下,最近在做毕赤酵母GS115表达,转化完,涂的YPDS平板,提取酵母基因组进行PCR验证,挑了10个菌落,发现都是空载体,没有转进去。怎么办?
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。。。
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632362481

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by MarchZR at 2015-11-20 17:02:28
毕赤酵母表达也属于真核细胞表达吧,没转进去,重新转啊,肯定是实验操作问题,,在试一遍

都是电转,应该不会出啥错误吧?是不是我挑的比较少啊?还是转化效率比较低呢
。。。
4楼2015-11-20 19:40:43
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MarchZR

银虫 (小有名气)

毕赤酵母表达也属于真核细胞表达吧,没转进去,重新转啊,肯定是实验操作问题,,在试一遍
2楼2015-11-20 17:02:28
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czfscf

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有可能是质粒出错 密码子木有做好  也有可能没有转进去 那就重新转。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

Ecological Genomics;the scientific walking hormone
3楼2015-11-20 18:37:09
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632362481

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by czfscf at 2015-11-20 18:37:09
有可能是质粒出错 密码子木有做好  也有可能没有转进去 那就重新转。

质粒都是测序过的,应该没啥问题吧,是不是转化效率低啊?我挑了十个了,是不是挑的少啊,我提基因组用OMEGAyeast kit提的,通用引物P的,你有没有做过?我这个是伯莱霉素筛选的,ppiczaB载体。
。。。
5楼2015-11-20 19:44:49
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