24小时热门版块排行榜    

查看: 1536  |  回复: 7

meiguiruier

金虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE 求救! 已有3人参与

最近一直在跑SDS-PAGE,做的是土壤蛋白,浓度真的很低,而且,带完全就不亮,或者说根本看不出来有带,旁边的是我点了牛血清蛋白的样2mg/ml,点了20ul,但是从第三条带开始就不清楚了,我是10%分离胶,120V,25mA,样品浓度1.45mg/ml,点了40ul,请问这样有没有问题,而且,如果进行纯化的话,应该选择什么样的试剂盒进行纯化?大神求救!!!!!

SDS-PAGE 求救!
1D328DFCC19F0CF516D49A03B8A3520D.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

多多交流,共同进步
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贾招圆

新虫 (小有名气)

两侧的,你的样品浓度太高,可以试着降低浓度,另外,你的胶底色太重,脱色没有脱好,。你土壤蛋白跑胶出不来是因为你的土壤蛋白浓度太低吧~建议增大上样量,做纯化,我接触的只有色谱柱,要做色谱柱的话,先分析你的目的蛋白性质,比如,等电点,分子量等等~~条件要摸索的~

发自小木虫Android客户端
2楼2015-11-18 11:20:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meiguiruier

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 贾招圆 at 2015-11-18 11:20:58
两侧的,你的样品浓度太高,可以试着降低浓度,另外,你的胶底色太重,脱色没有脱好,。你土壤蛋白跑胶出不来是因为你的土壤蛋白浓度太低吧~建议增大上样量,做纯化,我接触的只有色谱柱,要做色谱柱的话,先分析你 ...

如果用试剂盒,是不是也要分析的我蛋白质性质?我的单板浓度就是太低了,而且杂质很多,想做一下纯化,最近正在看,但是时间有点紧迫,所以想直接买试剂盒纯化~
多多交流,共同进步
3楼2015-11-18 12:05:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
样品浓度1.45mg/ml已经很高了,但从胶面上看却没有蛋白,不知楼主样品中是否含有非蛋白杂质?
生物科学
4楼2015-11-18 13:16:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meiguiruier

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-11-18 13:16:43
样品浓度1.45mg/ml已经很高了,但从胶面上看却没有蛋白,不知楼主样品中是否含有非蛋白杂质?

我是用紫外分光光度法测的浓度,蛋白中有杂质
多多交流,共同进步
5楼2015-11-18 13:56:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by meiguiruier at 2015-11-18 13:56:35
我是用紫外分光光度法测的浓度,蛋白中有杂质...

建议试一下用乙醇沉淀样品,一来可以浓缩,二可去除部分脂类杂质。
生物科学
6楼2015-11-19 08:04:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生物百科助手

新虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

你的BSA浓度太高了,建议减小浓度上样,样品浓度1.45mg/ml,上样20ul,足够了,但是电泳图还是没有条带,你确定样品中有你需要的蛋白,纯化的话可以使用土壤总蛋白纯化试剂盒
7楼2015-11-23 14:32:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

扶正2013

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

请尝试做原核表达,一般情况下都是过表达,在设计时加上His tag,以方便后面的纯化。
8楼2015-12-12 15:33:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 meiguiruier 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 让我中一个面上吧! +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +6 chengyan1220 2026-08-21 6/300 2026-08-21 14:47 by 20120902066
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +15 医学老男孩 2026-08-20 18/900 2026-08-21 13:46 by 医学老男孩
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +23 yaoyewhu2008 2026-08-20 25/1250 2026-08-21 12:19 by Poppy1104
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 7/350 2026-08-21 12:15 by weiyin
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 18/900 2026-08-21 11:53 by wuchongjun
[基金申请] 科研孤儿太难了 +15 我4大白菜 2026-08-20 16/800 2026-08-21 11:07 by yming1319
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见