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meiguiruier

金虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE 求救!已有3人参与

最近一直在跑SDS-PAGE,做的是土壤蛋白,浓度真的很低,而且,带完全就不亮,或者说根本看不出来有带,旁边的是我点了牛血清蛋白的样2mg/ml,点了20ul,但是从第三条带开始就不清楚了,我是10%分离胶,120V,25mA,样品浓度1.45mg/ml,点了40ul,请问这样有没有问题,而且,如果进行纯化的话,应该选择什么样的试剂盒进行纯化?大神求救!!!!!

SDS-PAGE 求救!
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贾招圆

新虫 (小有名气)

两侧的,你的样品浓度太高,可以试着降低浓度,另外,你的胶底色太重,脱色没有脱好,。你土壤蛋白跑胶出不来是因为你的土壤蛋白浓度太低吧~建议增大上样量,做纯化,我接触的只有色谱柱,要做色谱柱的话,先分析你的目的蛋白性质,比如,等电点,分子量等等~~条件要摸索的~

发自小木虫Android客户端
2楼2015-11-18 11:20:58
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meiguiruier

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 贾招圆 at 2015-11-18 11:20:58
两侧的,你的样品浓度太高,可以试着降低浓度,另外,你的胶底色太重,脱色没有脱好,。你土壤蛋白跑胶出不来是因为你的土壤蛋白浓度太低吧~建议增大上样量,做纯化,我接触的只有色谱柱,要做色谱柱的话,先分析你 ...

如果用试剂盒,是不是也要分析的我蛋白质性质?我的单板浓度就是太低了,而且杂质很多,想做一下纯化,最近正在看,但是时间有点紧迫,所以想直接买试剂盒纯化~
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3楼2015-11-18 12:05:58
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科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
样品浓度1.45mg/ml已经很高了,但从胶面上看却没有蛋白,不知楼主样品中是否含有非蛋白杂质?
生物科学
4楼2015-11-18 13:16:43
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meiguiruier

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-11-18 13:16:43
样品浓度1.45mg/ml已经很高了,但从胶面上看却没有蛋白,不知楼主样品中是否含有非蛋白杂质?

我是用紫外分光光度法测的浓度,蛋白中有杂质
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5楼2015-11-18 13:56:35
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科学小覃

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by meiguiruier at 2015-11-18 13:56:35
我是用紫外分光光度法测的浓度,蛋白中有杂质...

建议试一下用乙醇沉淀样品,一来可以浓缩,二可去除部分脂类杂质。
生物科学
6楼2015-11-19 08:04:07
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生物百科助手

新虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

你的BSA浓度太高了,建议减小浓度上样,样品浓度1.45mg/ml,上样20ul,足够了,但是电泳图还是没有条带,你确定样品中有你需要的蛋白,纯化的话可以使用土壤总蛋白纯化试剂盒
7楼2015-11-23 14:32:16
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扶正2013

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

请尝试做原核表达,一般情况下都是过表达,在设计时加上His tag,以方便后面的纯化。
8楼2015-12-12 15:33:55
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