应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 天啊，长得全是白斑，没有蓝斑？蓝白斑筛选问题求助
392/4返回列表上一页1234下一页
查看: 4713  |  回复: 38
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

gzbjzjchen

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wcq吴超群 at 2015-11-15 21:42:07
嗯，不是单一的片段。有很多片段，500-750bp之间的。基本要构建库
...

你酶切位点没有吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
11楼2015-11-15 21:49:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

方林然

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 218854055 at 2015-11-15 18:55:35
我用pGEM T EASY做TA克隆也是这样情况，用T7/SP6通用引物做菌落PCR全是假阳性，跑胶出现两条带，测序全部是载体。改了体系，换了药物和载体，还是那样，不知道为什么？

有人说takara的T载体其实不能做蓝白斑，用promega的吧

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
12楼2015-11-15 22:03:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wcq吴超群

新虫 (小有名气)
是这样，我的dna模板是用真菌通用引物引的植物内生真菌的所有片段，其实没有特殊的目的性，所以切胶回收的是500-750bp之间的所有片段，回收到了一起。然后想通过蓝白斑筛选的办法把这些片段尽可能的分开，然后用菌液测序，再去数据库比对序列，大致确定真菌菌种。我也是看一些博士论文这么做的，自己也没做过这些实验。
赞一下 回复此楼
13楼2015-11-15 22:18:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wcq吴超群

新虫 (小有名气)
好多人都有这种情况啊

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
14楼2015-11-15 23:18:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sugeng2000

新虫 (正式写手)
引用回帖:
1楼: Originally posted by wcq吴超群 at 2015-11-15 18:12:03
这两天做蓝白斑筛选，新手第一次做，今天观察平板时发现涂的10个板全部都是只长了白斑，一个蓝斑都没有看到？这是神马情况——————
      我先说下我做的过程，大神看看是不是哪里出了问题：
         连接： ...

我最开始涂板也遇到这种情况，后来证明我筛选药物配的不对，我是用氨卞筛选。你可以将筛选浓度提高，就是到平板时，多加点筛选的药试试，要是还不行就重配吧。你的菌落长的挺好的，都是单一菌落，你可以挑几个送测序，看看。祝实验早日成功。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
15楼2015-11-16 00:19:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackyoung

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
宝生物的这个载体如果有那么高的成功率真是神了……蓝白斑的问题本不是问题，因为即使是白班也只是有理论上的插入，并非一定就是对的。以本人粗浅的经验，pMD18-T这个载体连500bp以下的效果还不错，再大点就呵呵了，那个效率啊…
还有，你那IPTG那么高是什么鬼？我们可用不了那么多，你为毛加那么多？蓝白斑不成，八成是X-gal的问题，你得确认别人拿你的做成功过。同时，提醒一句，我遇到过一个公司的死活不行的情况（原因很多，比如说过期了，但分装的不告诉我们），换一个公司试试就好了。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
CestLaVie
16楼2015-11-16 00:32:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张正禹

新虫 (小有名气)
菌浓度太高了，涂板的时候，我们实验室都没有离心，取160微升直接涂板

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
17楼2015-11-16 00:34:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackyoung

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

还有，你只提到了平板，没有说抗生素抗性，请确认抗性是否对？抗生素浓度是否合适？不会过期或失效吧？如果没有抗性长个满板都是没有转化的没有蓝斑也很正常。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
CestLaVie
18楼2015-11-16 00:35:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
19楼2015-11-16 01:32:46
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

wcq吴超群

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by sugeng2000 at 2015-11-16 00:19:56
我最开始涂板也遇到这种情况，后来证明我筛选药物配的不对，我是用氨卞筛选。你可以将筛选浓度提高，就是到平板时，多加点筛选的药试试，要是还不行就重配吧。你的菌落长的挺好的，都是单一菌落，你可以挑几个送测 ...

我用的也是氨苄，100mg/ML，100ML的lb固体培养基加了100ul，……可能加氨苄倒板时温度高了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
20楼2015-11-16 08:33:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wcq吴超群 的主题更新
392/4返回列表上一页1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭