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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 天啊，长得全是白斑，没有蓝斑？蓝白斑筛选问题求助
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xushiqi001

新虫 (小有名气)
做实验的天才。６６６。

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31楼2015-11-16 17:36:45
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豆子的星空

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这转化率也太高了，你确定不是IPTG或者X-G有问题？还是建议坐下菌液PCR，要是没有问题就恭喜你了。不过现在蓝白斑都不做了，建议用红白斑筛选，很简单方便的！
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Idobelieve
32楼2015-11-17 21:22:57
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
红白班？我觉得我的xgal有问题，下次准备换了

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33楼2015-11-18 14:56:16
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yuhua123345

新虫 (初入文坛)
可以用下中美泰和他们公司的无缝连接试剂盒，连接加转化只需20分钟，还有他们的TOPO载体，真能做到无背景，并且连接加转化只需5分钟，阳性率能达到95%
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34楼2015-11-18 15:10:59
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wuwuqaz

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以做一个对照，就是转空载体进去，看看有没有蓝斑咯

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35楼2015-11-18 16:08:23
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
引用回帖:
35楼: Originally posted by wuwuqaz at 2015-11-18 16:08:23
可以做一个对照，就是转空载体进去，看看有没有蓝斑咯

哦，你的意思是说，不做载体连接，用空载体做转化，然后作为对照？下次试试

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36楼2015-11-19 01:21:00
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218854055

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我的问题已经解决了。全是白斑，还是可以继续用T7/SP6通用引物做菌落PCR，看不是预期大小片段就可以了，如果达到预期大小可以送测序。不怕白斑多，就怕假阳性。
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37楼2015-11-28 13:18:50
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1202ld

新虫 (初入文坛)
之前用的是PMD 19，这个转化效率更高，4℃孵育过夜。忘了具体是几个小时。细胞也是用的takara的JM109，我觉得你没蓝斑出来，细胞是没有问题的，会不会加错载体，因为我之前干过这样的蠢事…

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38楼2015-11-28 15:04:04
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判官小艾

木虫 (正式写手)

读研有时候需要的是勇气
这种情况怕是自己也不相信结果，不妨提质粒检测下，或者菌落pcr 验证下

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就让那流水带走光阴的故事
39楼2015-11-28 16:17:10
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