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hc2015

新虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这很正常好,现在就是这样,直接挑白斑忘下做。挑个菌摇瓶摇下,诱导下看表达怎么样就OK。祝顺利。
21楼2015-11-16 10:10:50
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
因为转化效率高,随便挑那个菌都可以用,现在基本都是直接挑继续下一步,现在试剂盒质量肯定比以前好,直接挑个白斑,摇摇诱导下看看。祝顺利
22楼2015-11-16 11:35:51
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jijianhuij

木虫 (小有名气)

你做的很仔细了,不确认的话送去测许或者酶切鉴定呢

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23楼2015-11-16 11:39:11
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

嗯,我已经挑了15个白斑,在跑pcr了,下午检测下条带。感谢各位的意见和建议。

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24楼2015-11-16 12:06:26
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by gzbjzjchen at 2015-11-15 18:15:56
因为转化效率高,随便挑那个菌都可以用

果然如你所言 ,我今天随机挑了15个白斑,跑了菌液pcr,全部都有我的目的条带,又去问了一个老师,他说全部是白斑也是正常的,现在的载体转化效率高,看条带的情况,可以进行摇菌测序

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25楼2015-11-16 16:31:32
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 218854055 at 2015-11-15 18:55:35
我用pGEM T EASY做TA克隆也是这样情况,用T7/SP6通用引物做菌落PCR全是假阳性,跑胶出现两条带,测序全部是载体。改了体系,换了药物和载体,还是那样,不知道为什么?

我今天挑了15个白斑,跑了pcr,全有目的条带

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26楼2015-11-16 16:34:32
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

引用回帖:
22楼: Originally posted by hc-material at 2015-11-16 11:35:51
因为转化效率高,随便挑那个菌都可以用,现在基本都是直接挑继续下一步,现在试剂盒质量肯定比以前好,直接挑个白斑,摇摇诱导下看看。祝顺利

嗯,试了,确实有目的条带,我第一次做蓝白斑,真是虚惊一场。

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27楼2015-11-16 16:35:32
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

引用回帖:
21楼: Originally posted by hc2015 at 2015-11-16 10:10:50
这很正常好,现在就是这样,直接挑白斑忘下做。挑个菌摇瓶摇下,诱导下看表达怎么样就OK。祝顺利。

嗯嗯,谢谢,确实有目的条带

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28楼2015-11-16 16:35:56
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by sugeng2000 at 2015-11-16 00:19:56
我最开始涂板也遇到这种情况,后来证明我筛选药物配的不对,我是用氨卞筛选。你可以将筛选浓度提高,就是到平板时,多加点筛选的药试试,要是还不行就重配吧。你的菌落长的挺好的,都是单一菌落,你可以挑几个送测 ...

嗯嗯,确实都有目的条带

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29楼2015-11-16 16:36:36
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

我今天随机挑了15个白斑,跑了菌液pcr,全部都有我的目的条带,又去问了一个老师,他说全部是白斑也是正常的,现在的载体转化效率高,看条带的情况,可以进行摇菌测序。第一次做蓝白斑,但愿是虚惊一场。愿接下来一切顺利,感谢各位的指导!!!
天啊,长得全是白斑,没有蓝斑?蓝白斑筛选问题求助



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30楼2015-11-16 16:39:23
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