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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 天啊，长得全是白斑，没有蓝斑？蓝白斑筛选问题求助
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hc2015

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这很正常好，现在就是这样，直接挑白斑忘下做。挑个菌摇瓶摇下，诱导下看表达怎么样就OK。祝顺利。
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21楼2015-11-16 10:10:50
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
因为转化效率高，随便挑那个菌都可以用，现在基本都是直接挑继续下一步，现在试剂盒质量肯定比以前好，直接挑个白斑，摇摇诱导下看看。祝顺利
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22楼2015-11-16 11:35:51
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jijianhuij

木虫 (小有名气)
你做的很仔细了，不确认的话送去测许或者酶切鉴定呢

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23楼2015-11-16 11:39:11
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
嗯，我已经挑了15个白斑，在跑pcr了，下午检测下条带。感谢各位的意见和建议。

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24楼2015-11-16 12:06:26
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by gzbjzjchen at 2015-11-15 18:15:56
因为转化效率高，随便挑那个菌都可以用

果然如你所言 ，我今天随机挑了15个白斑，跑了菌液pcr，全部都有我的目的条带，又去问了一个老师，他说全部是白斑也是正常的，现在的载体转化效率高，看条带的情况，可以进行摇菌测序

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25楼2015-11-16 16:31:32
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 218854055 at 2015-11-15 18:55:35
我用pGEM T EASY做TA克隆也是这样情况，用T7/SP6通用引物做菌落PCR全是假阳性，跑胶出现两条带，测序全部是载体。改了体系，换了药物和载体，还是那样，不知道为什么？

我今天挑了15个白斑，跑了pcr,全有目的条带

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26楼2015-11-16 16:34:32
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by hc-material at 2015-11-16 11:35:51
因为转化效率高，随便挑那个菌都可以用，现在基本都是直接挑继续下一步，现在试剂盒质量肯定比以前好，直接挑个白斑，摇摇诱导下看看。祝顺利

嗯，试了，确实有目的条带，我第一次做蓝白斑，真是虚惊一场。

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27楼2015-11-16 16:35:32
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by hc2015 at 2015-11-16 10:10:50
这很正常好，现在就是这样，直接挑白斑忘下做。挑个菌摇瓶摇下，诱导下看表达怎么样就OK。祝顺利。

嗯嗯，谢谢，确实有目的条带

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28楼2015-11-16 16:35:56
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by sugeng2000 at 2015-11-16 00:19:56
我最开始涂板也遇到这种情况，后来证明我筛选药物配的不对，我是用氨卞筛选。你可以将筛选浓度提高，就是到平板时，多加点筛选的药试试，要是还不行就重配吧。你的菌落长的挺好的，都是单一菌落，你可以挑几个送测 ...

嗯嗯，确实都有目的条带

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29楼2015-11-16 16:36:36
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
我今天随机挑了15个白斑，跑了菌液pcr，全部都有我的目的条带，又去问了一个老师，他说全部是白斑也是正常的，现在的载体转化效率高，看条带的情况，可以进行摇菌测序。第一次做蓝白斑，但愿是虚惊一场。愿接下来一切顺利，感谢各位的指导！！！
天啊，长得全是白斑，没有蓝斑？蓝白斑筛选问题求助



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30楼2015-11-16 16:39:23
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