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scofield111

银虫 (正式写手)

[求助] 转化涂板加kana和氨苄有区别么,还有阴性对照? 已有3人参与

请问为什么加入抗生素的平板,阳性克隆就能生长,还有阴性对照怎么做?是要培养的菌直接图在平板上么
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jeff瓜瓜

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不是加了抗生素你的班子上才长菌,抗生素的目的是为了筛选。你转化的质粒上带有相应的抗生素的抗性,能在那种抗生素存在的情况下生长,而没有转成功的则不能生长。也就是说理论上只有转进去质粒的大肠杆菌才能长在抗性板上,但是后期还需要PCR的验证
2楼2015-11-02 18:30:05
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想学好的学渣

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
最好酶切验证,菌液PCR假阳性真的太高了…

发自小木虫IOS客户端
7楼2015-11-04 09:44:06
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jeff瓜瓜

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by scofield111 at 2015-11-04 00:25:31
那就是菌落pcr了?引物用我扩增目的片段的设计的引物是吧?
...

最好用载体引物,按我师兄的说法就是:可能你在涂板的时候会有没转进去的,或没连接上的片段,可能隐藏在某个菌落下面,你在点菌的时候刚好带进去这个没转进去的质粒或者片段,然后你用片顿引物的时候就能以这个为模板P出类似目的条带的假阳性。楼下也说到了酶切验证比PCR要好,但是我们实验室一般都是PCR看有差不多大小的片段就直接送测序了。。。所以一般不酶切验证,你结合自己的实际情况看吧
8楼2015-11-04 10:22:42
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liping121200

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
氨苄和卡那都是根据你载体上的筛选基因来定的,阳性能在相应抗生素的平板上生长,菌液pcr可以作为一定程度的参考,但是对于要求高的,最好做个酶切鉴定,反正最后都要送测序,测序最能说明问题。
好好学习,天天向上
9楼2015-11-04 12:11:13
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lihanxuan93

铁杆木虫 (知名作家)

3楼2015-11-02 18:46:59
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scofield111

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jeff瓜瓜 at 2015-11-02 18:30:05
不是加了抗生素你的班子上才长菌,抗生素的目的是为了筛选。你转化的质粒上带有相应的抗生素的抗性,能在那种抗生素存在的情况下生长,而没有转成功的则不能生长。也就是说理论上只有转进去质粒的大肠杆菌才能长在抗 ...

后期做菌落pcr验证是么

发自小木虫Android客户端
4楼2015-11-03 00:09:23
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jeff瓜瓜

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by scofield111 at 2015-11-03 00:09:23
后期做菌落pcr验证是么
...

用合适的引物去PCR看看能不能P出自己要的片段,这样才能确定是否真的转进去了
5楼2015-11-03 12:40:46
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scofield111

银虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jeff瓜瓜 at 2015-11-03 12:40:46
用合适的引物去PCR看看能不能P出自己要的片段,这样才能确定是否真的转进去了...

那就是菌落pcr了?引物用我扩增目的片段的设计的引物是吧?

发自小木虫Android客户端
6楼2015-11-04 00:25:31
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scofield111

银虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by jeff瓜瓜 at 2015-11-04 10:22:42
最好用载体引物,按我师兄的说法就是:可能你在涂板的时候会有没转进去的,或没连接上的片段,可能隐藏在某个菌落下面,你在点菌的时候刚好带进去这个没转进去的质粒或者片段,然后你用片顿引物的时候就能以这个为 ...

嗯,谢谢,打算酶切验证测序

发自小木虫Android客户端
10楼2015-11-05 10:21:11
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