24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3684  |  回复: 12

scofield111

银虫 (正式写手)

[求助] 转化涂板加kana和氨苄有区别么,还有阴性对照? 已有3人参与

请问为什么加入抗生素的平板,阳性克隆就能生长,还有阴性对照怎么做?是要培养的菌直接图在平板上么
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jeff瓜瓜

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不是加了抗生素你的班子上才长菌,抗生素的目的是为了筛选。你转化的质粒上带有相应的抗生素的抗性,能在那种抗生素存在的情况下生长,而没有转成功的则不能生长。也就是说理论上只有转进去质粒的大肠杆菌才能长在抗性板上,但是后期还需要PCR的验证
2楼2015-11-02 18:30:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

想学好的学渣

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
最好酶切验证,菌液PCR假阳性真的太高了…

发自小木虫IOS客户端
7楼2015-11-04 09:44:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jeff瓜瓜

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by scofield111 at 2015-11-04 00:25:31
那就是菌落pcr了?引物用我扩增目的片段的设计的引物是吧?
...

最好用载体引物,按我师兄的说法就是:可能你在涂板的时候会有没转进去的,或没连接上的片段,可能隐藏在某个菌落下面,你在点菌的时候刚好带进去这个没转进去的质粒或者片段,然后你用片顿引物的时候就能以这个为模板P出类似目的条带的假阳性。楼下也说到了酶切验证比PCR要好,但是我们实验室一般都是PCR看有差不多大小的片段就直接送测序了。。。所以一般不酶切验证,你结合自己的实际情况看吧
8楼2015-11-04 10:22:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liping121200

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
氨苄和卡那都是根据你载体上的筛选基因来定的,阳性能在相应抗生素的平板上生长,菌液pcr可以作为一定程度的参考,但是对于要求高的,最好做个酶切鉴定,反正最后都要送测序,测序最能说明问题。
好好学习,天天向上
9楼2015-11-04 12:11:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lihanxuan93

铁杆木虫 (知名作家)

3楼2015-11-02 18:46:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scofield111

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jeff瓜瓜 at 2015-11-02 18:30:05
不是加了抗生素你的班子上才长菌,抗生素的目的是为了筛选。你转化的质粒上带有相应的抗生素的抗性,能在那种抗生素存在的情况下生长,而没有转成功的则不能生长。也就是说理论上只有转进去质粒的大肠杆菌才能长在抗 ...

后期做菌落pcr验证是么

发自小木虫Android客户端
4楼2015-11-03 00:09:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jeff瓜瓜

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by scofield111 at 2015-11-03 00:09:23
后期做菌落pcr验证是么
...

用合适的引物去PCR看看能不能P出自己要的片段,这样才能确定是否真的转进去了
5楼2015-11-03 12:40:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scofield111

银虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jeff瓜瓜 at 2015-11-03 12:40:46
用合适的引物去PCR看看能不能P出自己要的片段,这样才能确定是否真的转进去了...

那就是菌落pcr了?引物用我扩增目的片段的设计的引物是吧?

发自小木虫Android客户端
6楼2015-11-04 00:25:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scofield111

银虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by jeff瓜瓜 at 2015-11-04 10:22:42
最好用载体引物,按我师兄的说法就是:可能你在涂板的时候会有没转进去的,或没连接上的片段,可能隐藏在某个菌落下面,你在点菌的时候刚好带进去这个没转进去的质粒或者片段,然后你用片顿引物的时候就能以这个为 ...

嗯,谢谢,打算酶切验证测序

发自小木虫Android客户端
10楼2015-11-05 10:21:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 scofield111 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 333求调剂 +9 wfh030413@ 2026-04-03 9/450 2026-04-03 14:20 by 啊俊!
[考研] 专硕085601求调剂 +7 suyifei 2026-04-03 8/400 2026-04-03 14:00 by 欣喜777
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358 +4 cs0106 2026-04-03 4/200 2026-04-03 13:41 by 百灵童888
[考研] 建环,能源,土木老师路过看一看!!! +5 嘿嘿uu 2026-04-01 5/250 2026-04-03 11:47 by znian
[考研] 化学308分调剂 +19 你好明天你好 2026-03-30 20/1000 2026-04-03 11:34 by rjnabociow
[考研] 材料调剂 +4 吴棂颖! 2026-04-03 4/200 2026-04-03 11:06 by wangjy2002
[考研] 材料考研调剂 +10 Gs大王 2026-04-02 10/500 2026-04-03 09:47 by 遗忘消失的灆
[考研] 一志愿厦门大学材料工程专硕354找调剂!!! +8 贝呗钡钡 2026-03-30 8/400 2026-04-03 09:41 by hypershenger
[考研] 326求调剂 +3 9ahye 2026-04-02 4/200 2026-04-03 08:43 by Jaylen.
[考研] 复试调剂 +4 春日来信- 2026-04-03 4/200 2026-04-03 08:36 by JourneyLucky
[考研] 303求调剂 +8 DLkz1314. 2026-03-30 8/400 2026-04-02 09:08 by sanrepian
[考研] 一志愿北交大材料工程,总分358 +4 cs0106 2026-04-01 4/200 2026-04-02 07:42 by 尚水阁主
[考研] 267求调剂 +13 uiybh 2026-03-31 13/650 2026-04-01 10:25 by 探123
[考研] 求调剂,一志愿北林食品与营养095500,301分,已过六级,有科研经历 +4 快乐储蓄罐 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:26 by JourneyLucky
[考研] 080200学硕,机械工程专业277分,求带走! +4 瓶子PZ 2026-03-31 4/200 2026-03-31 20:16 by vgtyfty
[考研] 346求调剂 一志愿070303有机化学 +11 萝卜炖青菜 2026-03-28 12/600 2026-03-31 17:54 by xhai2011
[考研] 318求调剂 +10 陈晨79 2026-03-30 10/500 2026-03-31 17:37 by 544594351
[考研] 085404 22408 315分 +5 zhuangyan123 2026-03-31 6/300 2026-03-31 13:48 by limeifeng
[考研] 0703 化学 求调剂,一志愿山东大学 342 分 +7 Shern—- 2026-03-28 7/350 2026-03-30 16:31 by nothing投稿中
[考研] 085405 考的11408求各位老师带走 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 09:19 by 乐呵呵的追梦人
信息提示
请填处理意见