应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 构建表达载体后发现有移码，后修改没有成功
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2193  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

霜落雪

铁虫 (初入文坛)

[求助] 构建表达载体后发现有移码，后修改没有成功 已有1人参与

我用PCDNA构建的表达载体，在ECOR1和NOT1中间插入基因片段，第一次构建出的表达载体测序发现NOT1的GCGGCCGC序列变成了AGCGGCCGCA，（前面的A是我本来为了防止移码加上的，后面的A是以前别人用这个质粒时加在后面的基因上的我一开始没有发现）。总之多了一个碱基，之后想修改，就把下游引物上我加入的T给去了，然后重新构建，结果第二次测序结果出来跟第一次是一样的，还是AGCGGCCGCA。。不知道出了什么问题呢？还是我用的方法不对，不应该这么修改呢？求大神~~
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-11-01 19:04:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

霜落雪

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by latitudezy at 2015-11-02 00:28:17
用T载体做克隆时，不就是利用taq酶跑pcr加A的原理吗？我一般构建载体时会多挑几个克隆去测序
...

我查了一下Taq酶加A不是在整个序列的3'末端加A么，会在中间加么？我主要是这次挑了48个斑只有这一个样片段大小对了，其他的双酶切后都没连接上，所以再测就还是得重新做，但是现在不明白问题在哪里。
赞一下 回复此楼
7楼2015-11-02 09:46:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

latitudezy

新虫 (小有名气)
用什么DNA聚合酶跑地呢？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2015-11-01 19:27:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

霜落雪

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by latitudezy at 2015-11-01 19:27:57
用什么DNA聚合酶跑地呢？

用的rTaq酶
回复此楼
3楼2015-11-01 19:29:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

latitudezy

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-11-02 22:28:54
taq酶会加A么，多测几个吧

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2015-11-01 20:20:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085602调剂 初试总分335 +11 19123253302 2026-04-04 11/550 2026-04-05 06:54 by dongzh2009
[考研] 可跨专业调剂 +3 周的得地 2026-04-04 6/300 2026-04-04 22:21 by barlinike
[考研] 求调剂 一志愿西南交通大学085701环境工程 282分 +5 多多爱吃汉堡 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:14 by 啵啵啵0119
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +8 梁富贵险中求 2026-04-04 10/500 2026-04-04 20:57 by imissbao
[考研] 环境科学与工程334分求调剂 +9 王一一依依 2026-03-30 12/600 2026-04-04 20:55 by dongzh2009
[考研] 0703求调剂 +6 zizimo 2026-03-31 6/300 2026-04-04 14:16 by 无际的草原
[考研] 070300化学求调剂 +16 小黄鸭宝 2026-03-30 16/800 2026-04-04 11:49 by asdhh1991
[考研] 0710生物学336分求调剂 +6 kiyy 2026-04-01 8/400 2026-04-04 10:10 by kiyy
[考研] 求生物学专业调剂-332分 +5 云朵遛弯指南 2026-04-04 5/250 2026-04-04 10:05 by rzh123456
[考研] 总分328生物与医药考数学求调剂 +7 aaadim 2026-04-02 9/450 2026-04-03 22:53 by syh9288
[考研] 327求调剂 +9 小卡不卡. 2026-03-29 9/450 2026-04-03 19:48 by 百灵童888
[考研] 兽医调剂 +3 wh119216 2026-04-02 3/150 2026-04-03 19:34 by zrongyan
[考研] 266求调剂 +18 阳阳哇塞 2026-04-01 18/900 2026-04-03 18:38 by zllcz
[考研] 085501一志愿天工大，机械专硕求调剂，跨材料 +3 33上 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:08 by 1753564080
[考研] 273求调剂 +20 李芷新1 2026-03-31 20/1000 2026-04-03 09:58 by linyelide
[考研] 312求调剂 +6 小小墨123 2026-04-02 7/350 2026-04-03 07:32 by jsw79
[考研] 085600，320分求调剂 +5 大馋小子 2026-04-01 6/300 2026-04-01 19:40 by 唐沐儿
[考研] 353求调剂 +4 拉钩不许变 2026-04-01 4/200 2026-04-01 18:10 by 记事本2026
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-29 10/500 2026-03-31 19:52 by Dyhoer
[考研] 调剂 +4 GK72 2026-03-30 4/200 2026-03-30 20:32 by dick_runner
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭