应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 蛋白纯化不出来……
392/4返回列表上一页1234下一页
查看: 3354  |  回复: 38
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sxjcas

禁虫 (知名作家)
本帖内容被屏蔽
11楼2015-10-29 09:14:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaochen9002

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 总有二狗咬朕 at 2015-10-29 09:08:43
Superdex 75分子筛纯化两种蛋白的分子量相差至少2-3倍，所以楼主的蛋白应该无法用Superdex 75进行分离纯化。...

疯了，不知道咋办了
赞一下 回复此楼
12楼2015-10-29 12:19:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaochen9002

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 总有二狗咬朕 at 2015-10-29 09:08:43
Superdex 75分子筛纯化两种蛋白的分子量相差至少2-3倍，所以楼主的蛋白应该无法用Superdex 75进行分离纯化。...

啊，那应该用什么的填料啊？
赞一下 回复此楼
13楼2015-10-29 12:40:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaochen9002

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by sxjcas at 2015-10-29 09:14:46
试试离子交换了呗。

阴阳离子交换柱都用过了，虽然分出了两个峰，但是收集跑电泳后，仍然没有效果，疯了啊……
赞一下 回复此楼
14楼2015-10-29 12:43:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaochen9002: 金币+5 2015-11-07 18:06:18
建议好好优化下你的层析过程，离子交换的用DEAE或CM，先离子交换后镍柱，好好优化下层析过程，比如离子交换时，盐拉梯度，慢一些，镍柱拉梯度时，咪唑梯度慢些上升比如0-500mm,原本50个柱体积，你可以增加到200等，缓冲液在优化优化比如用Tris-Hcl试试，缓冲液中加200mm氯化钠，ph也试试，比如6.0.，7.0,8.0等。多试验。祝顺利。
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2015-10-29 13:32:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

高傲的范儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 总有二狗咬朕 at 2015-10-29 09:08:43
Superdex 75分子筛纯化两种蛋白的分子量相差至少2-3倍，所以楼主的蛋白应该无法用Superdex 75进行分离纯化。...

那应该用什么规格的分子筛呢？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
16楼2015-10-29 13:41:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

高傲的范儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by a86052 at 2015-10-28 16:56:46
不一定的，因为你既然从电泳图上看不出纯化效果，也许过分子筛并不能达到要求。如果像你说的，这些是截短表达，那么构建个C端标签的也许会更好。你可以先检测下是不是截短的蛋白...

怎么检测是不是截短蛋白？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
17楼2015-10-29 13:43:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

高傲的范儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by xiaochen9002 at 2015-10-29 08:46:27
20mM的PBS与咪唑，没有加吐温20与DTT。...

我室友最近在缓冲液里面加入了DTT和吐温20，去掉了很多带。但不知道是否影响你的蛋白活性，可以试试。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
18楼2015-10-29 13:45:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a86052

金虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 高傲的范儿 at 2015-10-29 13:43:18
怎么检测是不是截短蛋白？
...

做个western应该就可以。如果真是截短表达，不妨将TAG构建到蛋白的另一端试下
赞一下 回复此楼
19楼2015-10-29 14:01:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaochen9002

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 高傲的范儿 at 2015-10-29 13:43:18
怎么检测是不是截短蛋白？
...

菌体诱导后，其他的小分子量杂带也会大量出现。我推测是截短表达的。具体鉴定估计得用western，加his-tag的抗体。
赞一下 回复此楼
20楼2015-10-29 14:44:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaochen9002 的主题更新
392/4返回列表上一页1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[职场人生] 40+中年人失业后，还能找到好工作吗？ +11 xqy2009 2026-10-13 13/650 2026-10-15 21:32 by bear2007
[有机交流] 用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么 +3 18834002860 2026-10-12 6/300 2026-10-15 14:30 by 长沙摩尔信息科�
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+7 David1982 2026-10-13 11/550 2026-10-15 10:30 by zyqchem
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭