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xiaochen9002

新虫 (小有名气)

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[求助] 蛋白纯化不出来…… 已有6人参与

手上有一个蛋白，大肠表达后镍柱纯化，得到了目的条带，但是还有三条杂带，估计是截短表达的蛋白。目前已经用了好多方法去除杂带，50KDa的超滤管，阴阳离子交换柱以及分子筛，都没分开，不知道各位有什么好的方法没？实在快疯了，

电泳图附上，红色的是我要的条带，静候各位大牛的解答！

效果图.png

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1楼 2015-10-28 15:49:15

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

hc-material

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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xiaochen9002: 金币+5 2015-11-07 18:06:18

建议好好优化下你的层析过程，离子交换的用DEAE或CM，先离子交换后镍柱，好好优化下层析过程，比如离子交换时，盐拉梯度，慢一些，镍柱拉梯度时，咪唑梯度慢些上升比如0-500mm,原本50个柱体积，你可以增加到200等，缓冲液在优化优化比如用Tris-Hcl试试，缓冲液中加200mm氯化钠，ph也试试，比如6.0.，7.0,8.0等。多试验。祝顺利。