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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 蛋白纯化不出来……
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总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
27楼: Originally posted by xiaochen9002 at 2015-10-30 18:24:30
非常感谢！今天跟老师讨论了一下，老师也认为用亲和层析，多试几个条件。实验还是得一步一步来，不能着急，今天还被老师灌鸡汤了，哈哈……...

祝楼主早日成功  ～

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我好累，承受这个年纪不该有的帅！
31楼2015-10-31 10:18:18
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科学小覃

木虫 (正式写手)
楼主电泳跑得不错，能分享一下心得吗
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生物科学
32楼2015-10-31 20:28:31
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
切了胶，打个质谱就看结果

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33楼2015-10-31 22:35:55
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

非变性胶电泳，割胶。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
34楼2015-10-31 23:17:59
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xiaochen9002

新虫 (小有名气)
感谢大家的热烈讨论。我采用梯度咪唑的方法，在100mM的时候洗出来很纯的条带，虽然40-80mM也洗出了目的条带，但是混有大量杂带，如之前的电泳图。跟老师一块做了蛋白结构分析，怀疑His-tag可能没有完全暴露，所以低咪唑的时候就能随杂蛋白一起洗下来。虽然损失较大，但是由于表达量很高，所以可以忽略，嘻嘻，好开心，跟大家分享一下
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35楼2015-11-02 13:14:36
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xiaochen9002

新虫 (小有名气)
引用回帖:
32楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-10-31 20:28:31
楼主电泳跑得不错，能分享一下心得吗

我的就是80v压平后，110v跑到底，就是一般的protocol上的条件啊！我还有跑的更漂亮的呢，哈哈……只要把浓缩胶配的恰当，能够压平，一般情况都可以跑的很漂亮，我是这么觉得的
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36楼2015-11-02 13:19:22
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科学小覃

木虫 (正式写手)
引用回帖:
36楼: Originally posted by xiaochen9002 at 2015-11-02 13:19:22
我的就是80v压平后，110v跑到底，就是一般的protocol上的条件啊！我还有跑的更漂亮的呢，哈哈……只要把浓缩胶配的恰当，能够压平，一般情况都可以跑的很漂亮，我是这么觉得的...

我大概也是这个条件，用80v加120v，可下面小分子的条带总是拖得很宽，请问你浓缩胶和分离胶分别用多大得浓度，正常电泳大概多长时间？
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生物科学
37楼2015-11-03 19:42:53
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xiaochen9002

新虫 (小有名气)
引用回帖:
37楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-11-03 19:42:53
我大概也是这个条件，用80v加120v，可下面小分子的条带总是拖得很宽，请问你浓缩胶和分离胶分别用多大得浓度，正常电泳大概多长时间？...

12%的分离胶。具体时间没有注意过，估计一个多小时吧
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38楼2015-11-05 14:33:39
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科学小覃

木虫 (正式写手)
引用回帖:
38楼: Originally posted by xiaochen9002 at 2015-11-05 14:33:39
12%的分离胶。具体时间没有注意过，估计一个多小时吧...

好的，非常感谢。
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生物科学
39楼2015-11-06 12:31:35
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