应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 蛋白纯化不出来……
394/4返回列表上一页1234
查看: 3209  |  回复: 38
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
27楼: Originally posted by xiaochen9002 at 2015-10-30 18:24:30
非常感谢！今天跟老师讨论了一下，老师也认为用亲和层析，多试几个条件。实验还是得一步一步来，不能着急，今天还被老师灌鸡汤了，哈哈……...

祝楼主早日成功  ～

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
我好累，承受这个年纪不该有的帅！
31楼2015-10-31 10:18:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)
楼主电泳跑得不错，能分享一下心得吗
赞一下 回复此楼
生物科学
32楼2015-10-31 20:28:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (知名作家)
切了胶，打个质谱就看结果

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
33楼2015-10-31 22:35:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

非变性胶电泳，割胶。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
34楼2015-10-31 23:17:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaochen9002

新虫 (小有名气)
感谢大家的热烈讨论。我采用梯度咪唑的方法，在100mM的时候洗出来很纯的条带，虽然40-80mM也洗出了目的条带，但是混有大量杂带，如之前的电泳图。跟老师一块做了蛋白结构分析，怀疑His-tag可能没有完全暴露，所以低咪唑的时候就能随杂蛋白一起洗下来。虽然损失较大，但是由于表达量很高，所以可以忽略，嘻嘻，好开心，跟大家分享一下
赞一下 回复此楼
35楼2015-11-02 13:14:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaochen9002

新虫 (小有名气)
引用回帖:
32楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-10-31 20:28:31
楼主电泳跑得不错，能分享一下心得吗

我的就是80v压平后，110v跑到底，就是一般的protocol上的条件啊！我还有跑的更漂亮的呢，哈哈……只要把浓缩胶配的恰当，能够压平，一般情况都可以跑的很漂亮，我是这么觉得的
赞一下 回复此楼
36楼2015-11-02 13:19:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)
引用回帖:
36楼: Originally posted by xiaochen9002 at 2015-11-02 13:19:22
我的就是80v压平后，110v跑到底，就是一般的protocol上的条件啊！我还有跑的更漂亮的呢，哈哈……只要把浓缩胶配的恰当，能够压平，一般情况都可以跑的很漂亮，我是这么觉得的...

我大概也是这个条件，用80v加120v，可下面小分子的条带总是拖得很宽，请问你浓缩胶和分离胶分别用多大得浓度，正常电泳大概多长时间？
赞一下 回复此楼
生物科学
37楼2015-11-03 19:42:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaochen9002

新虫 (小有名气)
引用回帖:
37楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-11-03 19:42:53
我大概也是这个条件，用80v加120v，可下面小分子的条带总是拖得很宽，请问你浓缩胶和分离胶分别用多大得浓度，正常电泳大概多长时间？...

12%的分离胶。具体时间没有注意过，估计一个多小时吧
赞一下 回复此楼
38楼2015-11-05 14:33:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)
引用回帖:
38楼: Originally posted by xiaochen9002 at 2015-11-05 14:33:39
12%的分离胶。具体时间没有注意过，估计一个多小时吧...

好的，非常感谢。
回复此楼
生物科学
39楼2015-11-06 12:31:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaochen9002 的主题更新
394/4返回列表上一页1234
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 18:22 by 7huP8NPKZCp9
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 6/300 2026-08-15 18:18 by 7huP8NPKZCp9
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 18:10 by 7huP8NPKZCp9
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 6/300 2026-08-15 18:06 by 7huP8NPKZCp9
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +3 wangze12014 2026-08-14 4/200 2026-08-15 18:05 by babangida
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 7lpolszZVXgi 2026-08-14 6/300 2026-08-15 17:58 by 7huP8NPKZCp9
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +11 archvillain 2026-08-15 20/1000 2026-08-15 17:47 by 医学老男孩
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 17:42 by 7huP8NPKZCp9
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 6/300 2026-08-15 17:34 by 7huP8NPKZCp9
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 3/150 2026-08-15 12:41 by KxMI1BYBxWX1
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 07:09 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭