应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 蛋白纯化不出来……
394/4返回列表上一页1234
查看: 3008  |  回复: 38
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
27楼: Originally posted by xiaochen9002 at 2015-10-30 18:24:30
非常感谢！今天跟老师讨论了一下，老师也认为用亲和层析，多试几个条件。实验还是得一步一步来，不能着急，今天还被老师灌鸡汤了，哈哈……...

祝楼主早日成功  ～

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
我好累，承受这个年纪不该有的帅！
31楼2015-10-31 10:18:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)
楼主电泳跑得不错，能分享一下心得吗
赞一下 回复此楼
生物科学
32楼2015-10-31 20:28:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
切了胶，打个质谱就看结果

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
33楼2015-10-31 22:35:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

非变性胶电泳，割胶。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
34楼2015-10-31 23:17:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaochen9002

新虫 (小有名气)
感谢大家的热烈讨论。我采用梯度咪唑的方法，在100mM的时候洗出来很纯的条带，虽然40-80mM也洗出了目的条带，但是混有大量杂带，如之前的电泳图。跟老师一块做了蛋白结构分析，怀疑His-tag可能没有完全暴露，所以低咪唑的时候就能随杂蛋白一起洗下来。虽然损失较大，但是由于表达量很高，所以可以忽略，嘻嘻，好开心，跟大家分享一下
赞一下 回复此楼
35楼2015-11-02 13:14:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaochen9002

新虫 (小有名气)
引用回帖:
32楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-10-31 20:28:31
楼主电泳跑得不错，能分享一下心得吗

我的就是80v压平后，110v跑到底，就是一般的protocol上的条件啊！我还有跑的更漂亮的呢，哈哈……只要把浓缩胶配的恰当，能够压平，一般情况都可以跑的很漂亮，我是这么觉得的
赞一下 回复此楼
36楼2015-11-02 13:19:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)
引用回帖:
36楼: Originally posted by xiaochen9002 at 2015-11-02 13:19:22
我的就是80v压平后，110v跑到底，就是一般的protocol上的条件啊！我还有跑的更漂亮的呢，哈哈……只要把浓缩胶配的恰当，能够压平，一般情况都可以跑的很漂亮，我是这么觉得的...

我大概也是这个条件，用80v加120v，可下面小分子的条带总是拖得很宽，请问你浓缩胶和分离胶分别用多大得浓度，正常电泳大概多长时间？
赞一下 回复此楼
生物科学
37楼2015-11-03 19:42:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaochen9002

新虫 (小有名气)
引用回帖:
37楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-11-03 19:42:53
我大概也是这个条件，用80v加120v，可下面小分子的条带总是拖得很宽，请问你浓缩胶和分离胶分别用多大得浓度，正常电泳大概多长时间？...

12%的分离胶。具体时间没有注意过，估计一个多小时吧
赞一下 回复此楼
38楼2015-11-05 14:33:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科学小覃

木虫 (正式写手)
引用回帖:
38楼: Originally posted by xiaochen9002 at 2015-11-05 14:33:39
12%的分离胶。具体时间没有注意过，估计一个多小时吧...

好的，非常感谢。
回复此楼
生物科学
39楼2015-11-06 12:31:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaochen9002 的主题更新
394/4返回列表上一页1234
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317求调剂 +3 申子申申 2026-03-19 5/250 2026-03-19 13:47 by houyaoxu
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +4 脱颖而出 2026-03-16 11/550 2026-03-19 08:11 by 脱颖而出
[考研] 0703化学调剂 +8 妮妮ninicgb 2026-03-15 12/600 2026-03-19 05:55 by anny19840123
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +5 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 6/300 2026-03-18 17:53 by 无际的草原
[考研] 0703化学调剂 +4 pupcoco 2026-03-17 7/350 2026-03-18 12:14 by djl2006
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 265求调剂 +3 梁梁校校 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:12 by zhukairuo
[考研] 278求调剂 +5 烟火先于春 2026-03-17 5/250 2026-03-18 08:43 by 星空星月
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] ［0860］321分求调剂，ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 mxcz321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭