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总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
27楼: Originally posted by xiaochen9002 at 2015-10-30 18:24:30
非常感谢!今天跟老师讨论了一下,老师也认为用亲和层析,多试几个条件。实验还是得一步一步来,不能着急,今天还被老师灌鸡汤了,哈哈……...

祝楼主早日成功  ~

发自小木虫Android客户端
我好累,承受这个年纪不该有的帅!
31楼2015-10-31 10:18:18
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科学小覃

木虫 (正式写手)

楼主电泳跑得不错,能分享一下心得吗
生物科学
32楼2015-10-31 20:28:31
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


切了胶,打个质谱就看结果

发自小木虫Android客户端
33楼2015-10-31 22:35:55
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

非变性胶电泳,割胶。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
34楼2015-10-31 23:17:59
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xiaochen9002

新虫 (小有名气)

感谢大家的热烈讨论。我采用梯度咪唑的方法,在100mM的时候洗出来很纯的条带,虽然40-80mM也洗出了目的条带,但是混有大量杂带,如之前的电泳图。跟老师一块做了蛋白结构分析,怀疑His-tag可能没有完全暴露,所以低咪唑的时候就能随杂蛋白一起洗下来。虽然损失较大,但是由于表达量很高,所以可以忽略,嘻嘻,好开心,跟大家分享一下
35楼2015-11-02 13:14:36
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xiaochen9002

新虫 (小有名气)

引用回帖:
32楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-10-31 20:28:31
楼主电泳跑得不错,能分享一下心得吗

我的就是80v压平后,110v跑到底,就是一般的protocol上的条件啊!我还有跑的更漂亮的呢,哈哈……只要把浓缩胶配的恰当,能够压平,一般情况都可以跑的很漂亮,我是这么觉得的
36楼2015-11-02 13:19:22
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科学小覃

木虫 (正式写手)

引用回帖:
36楼: Originally posted by xiaochen9002 at 2015-11-02 13:19:22
我的就是80v压平后,110v跑到底,就是一般的protocol上的条件啊!我还有跑的更漂亮的呢,哈哈……只要把浓缩胶配的恰当,能够压平,一般情况都可以跑的很漂亮,我是这么觉得的...

我大概也是这个条件,用80v加120v,可下面小分子的条带总是拖得很宽,请问你浓缩胶和分离胶分别用多大得浓度,正常电泳大概多长时间?
生物科学
37楼2015-11-03 19:42:53
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xiaochen9002

新虫 (小有名气)

引用回帖:
37楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-11-03 19:42:53
我大概也是这个条件,用80v加120v,可下面小分子的条带总是拖得很宽,请问你浓缩胶和分离胶分别用多大得浓度,正常电泳大概多长时间?...

12%的分离胶。具体时间没有注意过,估计一个多小时吧
38楼2015-11-05 14:33:39
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科学小覃

木虫 (正式写手)

引用回帖:
38楼: Originally posted by xiaochen9002 at 2015-11-05 14:33:39
12%的分离胶。具体时间没有注意过,估计一个多小时吧...

好的,非常感谢。
生物科学
39楼2015-11-06 12:31:35
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