应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 毕赤酵母表达脂肪酶基因
41/1返回列表
查看: 833  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wyfdgg

新虫 (初入文坛)

[交流] 毕赤酵母表达脂肪酶基因 已有2人参与

我是利用Ppic9k来转化毕赤酵母的，连入基因之后再用BglII酶切，然后电转毕赤酵母细胞。基因的长度在1000-2000之间。
转化后在RDB平板上面涂板，有很多个白色的单克隆。然后用YPD洗板在突细胞悬液到YPD遗传霉素平板上面，我用的遗传霉素浓度为1g/l、2g/l、3g/l、4g/l。但是即使是4g/l的平板上面长出来的单克隆，提取基因组DNA之后做PCR验证，大部分也不能批到目的条带。少数含有目的条带的菌株进行产酶培养的时候，几乎没有酶活。而且跑SDS-PAGE时，也看不到蛋白条带。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-10-27 15:50:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jjwhl

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没有酶活跟蛋白条带说明表达量低，需要提高表达量才行
赞一下 回复此楼
2楼2015-11-04 16:13:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wyfdgg

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jjwhl at 2015-11-04 16:13:01
没有酶活跟蛋白条带说明表达量低，需要提高表达量才行

我已经是从4g/l的平板上面挑选的了   应该基因插入数量很多了
赞一下 回复此楼
3楼2015-11-12 09:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

justsangsue

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
表达效率和基因拷贝数没有必然联系，拷贝数多可以减少密度基因突变导致的目标蛋白异常。而且蛋白是否表达还是要以wb为准吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2015-11-27 09:37:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wyfdgg 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂310 +3 温柔的晚安 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:16 by peike
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 335分 | 材料与化工专硕 | GPA 4.07 | 有科研经历 +6 cccchenso 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 08工学调剂 +13 用户573181 2026-03-20 18/900 2026-03-25 22:00 by zbssa
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
[考研] 281求调剂 +4 Koxui 2026-03-24 5/250 2026-03-25 11:38 by userper
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +6 @taotao 2026-03-19 6/300 2026-03-25 08:37 by 木托莫露露
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +5 谷雨上岸 2026-03-23 6/300 2026-03-24 16:32 by laoshidan
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗？ +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭