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毕赤酵母表达脂肪酶基因 已有2人参与
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我是利用Ppic9k来转化毕赤酵母的，连入基因之后再用BglII酶切，然后电转毕赤酵母细胞。基因的长度在1000-2000之间。 转化后在RDB平板上面涂板，有很多个白色的单克隆。然后用YPD洗板在突细胞悬液到YPD遗传霉素平板上面，我用的遗传霉素浓度为1g/l、2g/l、3g/l、4g/l。但是即使是4g/l的平板上面长出来的单克隆，提取基因组DNA之后做PCR验证，大部分也不能批到目的条带。少数含有目的条带的菌株进行产酶培养的时候，几乎没有酶活。而且跑SDS-PAGE时，也看不到蛋白条带。 |
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