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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒连接转化后变小
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nbadlq

铁虫 (初入文坛)

[求助] 质粒连接转化后变小 已有1人参与

质粒用的PIB139，大约6KB，目的基因1.5KB，酶切纯化跑胶验证是对的。然后做链接20ul体系，2ul质粒8ul目的基因。取9ul连接产物转化后，在板上长得感觉不错。试剂盒提取质粒跑胶验证出现了怪现象。重组质粒变小了，质粒酶切貌似也切不开。

质粒连接转化后变小
酶切纯化质粒和目的基因.jpg


质粒连接转化后变小-1
P51025-094112.jpg


质粒连接转化后变小-2
原质粒、连接质粒、连接质粒后面是双酶切
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1楼 2015-10-26 17:17:30
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尘梦心殇

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by nbadlq at 2015-10-26 17:19:33
做了两个多月了，一直得不到想要的结果。希望高手帮忙。
以前用这个质粒连接1KB片段，一次成功。      别沉

楼主有知道原因吗?我现在也是这样，质粒连接好之后，变小了，但目标片段都能p出来。
考虑是质粒酶切连接后，超螺旋状态，但不知道是不是。

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3楼2022-01-13 18:01:36
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nbadlq

铁虫 (初入文坛)
做了两个多月了，一直得不到想要的结果。希望高手帮忙。
以前用这个质粒连接1KB片段，一次成功。      别沉
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2楼2015-10-26 17:19:33
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局也土豆

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 尘梦心殇 at 2022-01-13 18:01:36
楼主有知道原因吗?我现在也是这样，质粒连接好之后，变小了，但目标片段都能p出来。
考虑是质粒酶切连接后，超螺旋状态，但不知道是不是。
...

去测一下序，看看是不是你的基因

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4楼2022-01-18 21:29:47
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澍上莓果儿

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 尘梦心殇 at 2022-01-13 18:01:36
楼主有知道原因吗?我现在也是这样，质粒连接好之后，变小了，但目标片段都能p出来。
考虑是质粒酶切连接后，超螺旋状态，但不知道是不是。
...

我的之前连上的目的片段现在都P不出来了，也不知道咋回事，求各路大神指点！
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5楼2022-06-24 14:36:49
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